වර්තමාන† වත්මන් ලිපිනය: OX11 0DE, UK, දියමන්ති ගොඩනැගිල්ල, හාවෙල් විද්‍යා හා නවෝත්පාදන උද්‍යානය, ඩයට්කෝට්, ඔක්ස්ෆර්ඩ්ෂයර්, UK, දියමන්ති ආලෝක මූලාශ්‍ර සමාගම, සීමාසහිත, ඉලෙක්ට්‍රොනික ජීව විද්‍යාත්මක රූපකරණ මධ්‍යස්ථානය.
ප්‍රතික්‍රියා මධ්‍යස්ථාන ආලෝක-අස්වැන්න සංකීර්ණය 1 (RC-LH1) දම් පැහැති ෆොටෝට්‍රොෆික් බැක්ටීරියා වල මූලික ප්‍රභාසංස්ලේෂක සංරචකයයි. අපි රොඩොප්සියුඩොමොනාස් පැලුස්ට්‍රිස් වෙතින් RC-LH1 සංකීර්ණයේ ක්‍රියෝ-ඉලෙක්ට්‍රෝන අන්වීක්ෂීය ව්‍යුහ දෙකක් හඳුන්වා දුන්නෙමු. RC-LH114-W සංකීර්ණයේ 2.65-Å විභේදන ව්‍යුහය RC වටා ඇති උප ඒකක LH1 ලූප 14 කින් සමන්විත වන අතර එය ප්‍රෝටීන් W මගින් බාධා කරනු ලබන අතර ප්‍රෝටීන්-W නොමැති සංකීර්ණය RC වලින් වට වූ සම්පූර්ණයෙන්ම RC සංයුතියකි. වසා දැමූ උප ඒකක 16 LH1 ලූපය. මෙම ව්‍යුහයන් සංසන්දනය කිරීමෙන් RC-LH1 සංකීර්ණයේ ක්විනෝනයේ ගතිකත්වය පිළිබඳ අවබෝධයක් ලබා දෙන අතර, RC QB අඩවියේ ක්විනෝන් බන්ධනය කිරීමේදී කලින් තීරණය නොකළ අනුකූලතා වෙනස්කම් මෙන්ම සහායක ක්විනෝන් බන්ධන ස්ථානවල පිහිටීමද ඇතුළත් වේ, ඒවා RC වෙත යැවීමට උපකාරී වේ. W ප්‍රෝටීනයේ අද්විතීය ව්‍යුහය LH1 ලූපය වැසීම වළක්වයි, එමඟින් ක්විනෝන්/ක්විනොලෝන් හුවමාරුව වේගවත් කිරීම සඳහා නාලිකාවක් නිර්මාණය කරයි.
ප්‍රභාසංස්ලේෂණය මගින් සපයන ශක්තිය පෘථිවියේ සියලුම ජීවීන් පාහේ පවත්වා ගත හැකි අතර, එය සූර්ය ජෛව තාක්‍ෂණය සඳහා විශාල විභවයක් ඇත. ගෝලීය ප්‍රභාසංස්ලේෂණය ප්‍රවර්ධනය කරන අතරම, දම් පැහැති ෆොටෝට්‍රොෆික් බැක්ටීරියා විවිධ ශක්ති ක්‍රම සහ පරිවෘත්තීය හැකියාවන් ද ප්‍රදර්ශනය කරයි. ඒවාට ප්‍රභාසංස්ලේෂණය වළක්වා අඳුරේ විෂමපෝෂිත බැක්ටීරියා ලෙස වර්ධනය විය හැකිය, නයිට්‍රජන් සහ කාබන් ඩයොක්සයිඩ් සවි කළ හැකිය, හයිඩ්‍රජන් නිපදවිය හැකිය, සහ ඇරෝමැටික සංයෝග හායනය කළ හැකිය (1-3). මෙම ක්‍රියාවලීන් සඳහා ශක්තිය සැපයීම සඳහා, ආලෝකය ඉක්මනින් හා කාර්යක්ෂමව රසායනික ශක්තිය බවට පරිවර්තනය කළ යුතුය. ආලෝකය උගුලට හසු කර ගන්නා ඇන්ටෙනා සංකීර්ණය ආලෝකය අවශෝෂණය කර සිරවී ඇති ශක්තිය ප්‍රතික්‍රියා මධ්‍යස්ථානයට (RC) මාරු කරන විට මෙම ක්‍රියාවලිය ආරම්භ වන අතර එමඟින් ආරෝපණ වෙන් කිරීම ආරම්භ වේ (4 - 7). දම් පැහැති ෆොටෝට්‍රොෆික් බැක්ටීරියා වල ප්‍රභාසංස්ලේෂණයේ මූලික ඒකකය 2 වර්ගයේ RC වලින් සමන්විත වන අතර එය ආලෝක අස්වනු නෙලීමේ සංකීර්ණය 1 (LH1) වලින් වට වී RC-LH1 හර සංකීර්ණය සාදයි. LH1 සෑදී ඇත්තේ වක්‍ර αβ විෂමපෝෂිත අරාවකින් වන අතර, ඒ සෑම එකක්ම බැක්ටීරියා ක්ලෝරෝෆිල් (BChl) අණු දෙකක් සහ කැරොටිනොයිඩ් එකක් හෝ දෙකක් (8-12) බන්ධනය කරයි. සරලම LH1 ඇන්ටනාව සංවෘත ලූපයක RC (9-13) වට කර ඇති αβ විෂම ධමක 16ක් හෝ 17කින් සමන්විත වේ, නමුත් අනෙකුත් මූලික සංකීර්ණවල, ට්‍රාන්ස්මෙම්බ්‍රේන් පෙප්ටයිඩ අවට LH1 හි අඛණ්ඩතාවයට බාධා කරයි, එමඟින් RC සහ සයිටොක්‍රෝම් bc1 සංකීර්ණය අතර ක්විනෝල්/ක්විනෝන් විසරණය ප්‍රවර්ධනය කරයි (11, 13-15). දම් පැහැති ෆොටෝට්‍රොෆික් ශාකයක් වන රොඩොප්සියුඩොමොනාස් (Rps.) යනු ප්‍රභාසංස්ලේෂණයට සහාය වන ශක්තිය සහ ඉලෙක්ට්‍රෝන හුවමාරුව තේරුම් ගත හැකි ආදර්ශ ජීවියෙකි. Rps හි පළමු ස්ඵටික ව්‍යුහය. පැලුස්ට්‍රිස් RC-LH1 සංකීර්ණයේ ආකෘතිය RC වන අතර එය විෂම ධමක LH1 ලූප 15කින් වට වී ඇති අතර ඒවා "ප්‍රෝටීන් W" (14) ලෙස හඳුන්වන නොදන්නා ප්‍රෝටීනයකින් බාධා කරනු ලැබේ. ප්‍රෝටීන්-W පසුව RPA4402 ලෙස හඳුනා ගන්නා ලදී, එය පුරෝකථනය කරන ලද ට්‍රාන්ස්මෙම්බ්‍රේන් හෙලික තුනක් (TMH) සහිත සංලක්ෂිත නොකළ 10.5kDa ප්‍රෝටීනයකි (16). RC-L, M (pufL, pufM) සහ LH1α, β (pufA, pufB) උප ඒකක කේතනය කරන ජාන සඳහා භාවිතා කරන නාමකරණයට අනුකූල වන පරිදි rpa4402 ජාන කේතනය කරන ප්‍රෝටීන් W pufW ලෙස නැවත නම් කිරීමට අපි යෝජනා කරමු. සිත්ගන්නා කරුණ නම්, ප්‍රෝටීන්-W පවතින්නේ RC-LH1 වලින් 10% ක් පමණ වන අතර, Rps. palustris වෙනස් RC-LH1 සංකීර්ණ දෙකක් නිපදවයි. මෙහිදී, අපි මූලික සංකීර්ණ දෙකක අධි-විභේදන ක්‍රියෝ-EM (ක්‍රියෝ-EM) ව්‍යුහයන් වාර්තා කරමු, එකක් ප්‍රෝටීන් W සහ 14 αβ heterodimers සහිත, අනෙක ප්‍රෝටීන් W සහ සංවෘත 16 Heterodimer LH1 ලූපයක් නොමැතිව. අපගේ ව්‍යුහය Rps. palustris හි RC-LH1 සංකීර්ණය අවබෝධ කර ගැනීමේ පියවර වෙනසක් නියෝජනය කරයි, මන්ද අපි එක් එක් ප්‍රභේදයේ සමජාතීය ජනගහනය විශ්ලේෂණය කර ඇති අතර එක් එක් පෙප්ටයිඩ සහ බැඳී ඇති වර්ණක සහ අදාළ ලිපිඩ සහ ක්විනෝන් පැහැදිලිව පැවරීමට ප්‍රමාණවත් විභේදනයක් ඇත. මෙම ව්‍යුහයන් සංසන්දනය කිරීමෙන් පෙනී යන්නේ මෙතෙක් වෙනත් කිසිදු RC-LH1 සංකීර්ණයක හමු නොවූ TMH ප්‍රෝටීන-W තුන ක්විනෝන්/ක්විනෝන් හුවමාරුව වේගවත් කිරීම සඳහා ක්විනෝන් නාලිකාවක් ජනනය කරන බවයි. සංරක්ෂිත ලිපිඩ සහ ක්විනෝන් බන්ධන ස්ථාන ගණනාවක් හඳුනාගෙන ඇති අතර, ක්විනෝන් සහ RC සංයෝජනයෙන් පසු ඔක්සිජන් සහිත ෆොටෝට්‍රොෆික් ජීවීන්ගේ ප්‍රභා පද්ධති II (PSII) RC සඳහා සුදුසු විය හැකි නව අනුකූලතා වෙනසක් අපි හෙළි කර ඇත්තෙමු. අපගේ සොයාගැනීම් දම් පැහැති ෆොටෝට්‍රොෆික් බැක්ටීරියා වල RC-LH1 මූලික සංකීර්ණයේ ක්විනෝන්/ක්විනෝන් බන්ධනය සහ හුවමාරුවේ චාලක විද්‍යාව පිළිබඳ නව අවබෝධයක් ලබා දෙයි.
Rps. palustris හි ඇති සංකීර්ණ දෙක පිළිබඳ සවිස්තරාත්මක අධ්‍යයනයක් පහසු කිරීම සඳහා, අපි ජෛව රසායනික ක්‍රම මගින් එක් එක් RC-LH1 හුදකලා කරමු. ප්‍රෝටීන් W-ඌණතා සංකීර්ණය (මින් ඉදිරියට ΔpufW ලෙස හැඳින්වේ) pufW ජානය නොමැති වික්‍රියාවෙන් පිරිසිදු කරන ලද අතර (16), එක් RC-LH1 සංකීර්ණයක් පමණක් නිපදවිය හැකිය. ප්‍රෝටීන් W-අඩංගු සංකීර්ණය වික්‍රියාවක් මගින් නිපදවනු ලැබේ. මෙම වික්‍රියාවේ ප්‍රෝටීන් W එහි C-පර්යන්තයේ 10x His ටැගයක් සමඟ වෙනස් කර ඇති අතර, එමඟින් ප්‍රෝටීන් W-අඩංගු සංකීර්ණය ලෝහ නිශ්චල කිරීමෙන් බොහෝ ඌණ ප්‍රෝටීන් W සමඟ ඵලදායී ලෙස ඒකාබද්ධ කළ හැකිය. සංකීර්ණය ඵලදායී ලෙස වෙන් කරනු ලැබේ (16) Affinity Chromatography (IMAC).
රූපය 1 හි දැක්වෙන පරිදි, සංකීර්ණ දෙකෙහිම LH1 ඇන්ටෙනාවකින් වට වූ උප ඒකක තුනක RC (RC-L, RC-M සහ RC-H) අඩංගු වේ. ප්‍රෝටීන්-W නොමැති සංකීර්ණයේ 2.80-A ව්‍යුහය αβ විෂම ද්විමාන 16 ක් පෙන්වන අතර, RC සම්පූර්ණයෙන්ම වටා සංවෘත LH1 ලූපයක් සාදයි, මෙතැන් සිට RC-LH116 සංකීර්ණය ලෙස හැඳින්වේ. ප්‍රෝටීන්-W අඩංගු සංකීර්ණයේ 2.65Å ව්‍යුහයට ප්‍රෝටීන්-W මගින් බාධා කරන ලද 14-හීටරෝඩයිමර් LH1 ඇත, මෙතැන් සිට RC-LH114-W ලෙස හැඳින්වේ.
(A සහ B) සංයෝගයේ මතුපිට නිරූපණය. (C සහ D) දඬු වලින් ප්‍රකාශිත බන්ධිත වර්ණක. (E සහ F) සයිටොප්ලාස්මික් මතුපිටින් නිරීක්ෂණය කරන ලද සංකීර්ණවල කාටූන් වලින් නිරූපණය වන පෙප්ටයිඩ සහ LH1 උප ඒකක ඇති අතර, ප්‍රෝටීන්-W පරතරයෙන් දක්ෂිණාවර්තව අංකනය කර ඇත [Rba අංකනයට අනුකූල වේ. sphaeroides සංකීර්ණය (13)]. LH1-α සඳහා, ප්‍රෝටීන් උප ඒකකයේ වර්ණය කහ වේ; LH1-β සඳහා, ප්‍රෝටීන් උප ඒකකයේ වර්ණය නිල් වේ; ප්‍රෝටීන්-W සඳහා, ප්‍රෝටීන් රතු වේ; RC-H සඳහා, එය සයන් වේ; RC-L සඳහා, එය තැඹිලි වේ; RC-M සඳහා, මැජෙන්ටා වේ. සහ සාධක දඬු වලින් නිරූපණය වේ, කොළ පැහැය BChl සහ BPh a අණු නියෝජනය කරයි, දම් පැහැය කැරොටිනොයිඩ් නියෝජනය කරයි, සහ කහ පැහැය UQ10 අණු නියෝජනය කරයි. (G සහ H) RC-LH114-W සංකීර්ණය (G) සහ RC-LH116 සංකීර්ණය (H) හි සමාන කලාපයේ ප්‍රෝටීන්-W පරතරයේ විශාලනය කරන ලද දසුන. සහසාධක අවකාශ පිරවීමේ ආකාරයෙන් පෙන්වනු ලබන අතර, චෙලේටඩ් ක්විනෝන් නිල් පැහැයෙන් පෙන්වනු ලැබේ. ප්‍රෝටීන්-W පරතරය (G) හි නිල් පැහැති ඉරි සහිත රේඛාවකින් ඉස්මතු කර ඇති අතර, LH116 වළල්ල මත ක්විනෝන්/ක්විනොලෝල් විසරණය වන කුඩා සිදුරු (H) හි කළු පැහැති ඉරි සහිත රේඛාවකින් ඉස්මතු කර ඇත.
රූපය 1 (A සහ B) මඟින් LH1αβ heterodimers හි විවෘත හෝ සංවෘත අරා වලින් වට වූ RC පෙන්වන අතර, ඒ සෑම එකක්ම BChl දෙකක් සහ එක් කැරොටිනොයිඩ් එකක් බන්ධනය කරයි (රූපය 1, C සහ D). පෙර අධ්‍යයනයන් පෙන්වා දී ඇත්තේ Rps යනු LH1 සංකීර්ණය බවයි. ස්පිරුලිනා සැන්තින් වල ජෛව සංස්ලේෂණ මාර්ගයේ, මෙම විශේෂවල කැරොටිනොයිඩ් මිශ්‍ර ජනගහනයක් අඩංගු වේ (17). කෙසේ වෙතත්, ස්පිරොපිරොක්සැන්ටින් ප්‍රමුඛ කැරොටිනොයිඩ් වන අතර එහි ඝනත්වය සතුටුදායකය. එබැවින්, අපි සියලුම LH1 බන්ධන ස්ථානවල ස්පිරොක්සැන්ටින් ආකෘතිකරණය කිරීමට තෝරා ගත්තෙමු. ඇල්ෆා සහ බීටා පොලිපෙප්ටයිඩ කෙටි පටල බාහිර කලාප සහිත තනි TMH වේ (රූපය 1, A, B, E, සහ F). C-පර්යන්තයේ අපද්‍රව්‍ය 17 ක ඝනත්වය නිරීක්ෂණය නොකළද, සංකීර්ණ දෙකෙහිම ඇල්ෆා පොලිපෙප්ටයිඩය Met1 සිට Ala46 දක්වා වෙන් කරන ලදී. RC-LH116 හි β පොලිපෙප්ටයිඩය Gly4 සිට Tyr52 දක්වාත්, RC-LH114-W හි Ser5 සිට Tyr52 දක්වාත් අඩු කරන ලදී. N-පර්යන්ත 3 හෝ 4 ක ඝනත්වයක් හෝ C-පර්යන්ත 13 ක ඝනත්වයක් නිරීක්ෂණය නොවීය (රූපය S1). වල්-වර්ගයේ වික්‍රියාවෙන් සකස් කරන ලද මිශ්‍ර RC-LH1 සංකීර්ණයේ ස්කන්ධ වර්ණාවලීක්ෂ විශ්ලේෂණයෙන් පෙන්නුම් කළේ අතුරුදහන් වූ කලාපය මෙම පෙප්ටයිඩවල විෂමජාතීය බෙදීමේ ප්‍රතිඵලයක් බවයි (රූපය S1 සහ S2). α-Met1 හි N-පර්යන්ත ආකෘතිකරණය ද නිරීක්ෂණය කරන ලදී (f). විශ්ලේෂණයෙන් පෙන්නුම් කළේ α-පෙප්ටයිඩය fMet1 සිට Asp42/Ala46/Ala47/Ala50 දක්වා අපද්‍රව්‍ය වලින් සමන්විත වන අතර β-පෙප්ටයිඩය Ser2 සිට Ala53 දක්වා අපද්‍රව්‍ය වලින් සමන්විත වන අතර එය අඩු-උෂ්ණත්ව EM ඝනත්ව සිතියම සමඟ හොඳ එකඟතාවයකින් යුක්ත වේ.
α-His29 සහ β-His36 සම්බන්ධීකරණය BChls මුහුණට මුහුණලා ඇති කරයි; සෑම αβ heterodimer එකක්ම එහි අසල්වැසියන් සමඟ එක්රැස් වී RC වටා විවෘත ලූපයක් (RC-LH114-W) හෝ සංවෘත ලූපයක් (RC-LH116) සාදයි. එක්සයිටෝන් සම්බන්ධිත වර්ණක අරාව (රූපය 1, C සහ D). RC-LH114-W හි 877 nm කලාපය හා සසඳන විට, RC-LH116 හි 880 nm අවශෝෂණ රතු මාරුව 3 nm වේ (රූපය 2A). කෙසේ වෙතත්, චක්‍රලේඛ ද්වි-වර්ණ වර්ණාවලිය පාහේ සමාන වේ (රූපය 2B), එයින් පෙන්නුම් කරන්නේ විවෘත සහ සංවෘත ලූප අතර පැහැදිලි වෙනසක් තිබුණද, BChls හි දේශීය පරිසරය ඉතා සමාන බවයි. අවශෝෂණ රතු මාරුව තාප චලිතය අඩුවීම සහ සංවෘත ලූපයේ ස්ථායිතාව වැඩි වීම (18, 19), සංවෘත ලූපය නිසා ඇතිවන වර්ණක සම්බන්ධකයේ වෙනස (20, 21) හෝ මෙම බලපෑම් දෙකෙහි සංයෝජනයක ප්‍රතිඵලයක් විය හැකිය (11).
(A) පාරජම්බුල/දෘශ්‍ය/අධෝරක්ත ආසන්න අවශෝෂණ වර්ණාවලිය, ඒවායේ උච්චයන් ඒවායේ අනුරූප වර්ණක සමඟ සලකුණු කර 775 nm හි BPh උච්චයට සාමාන්‍යකරණය කර ඇත. (B) චක්‍රලේඛ ද්වි වර්ණාවලිය 805 nm හි BChl අවශෝෂණයට සාමාන්‍යකරණය කර ඇත. (C සහ D) RC-LH114-W සංකීර්ණයේ (C) සහ RC-LH116 සංකීර්ණයේ (D) කාල-විසඳුම් අවශෝෂණ වර්ණාවලියෙන් තෝරාගත් ΔA වර්ණාවලිය. වඩා හොඳ සංසන්දනයක් සඳහා, සියලුම වර්ණාවලි 0.2 ps හි −A හි ∆A දක්වා සාමාන්‍යකරණය කර ඇත. (E) UQ2 හි විවිධ සාන්ද්‍රණයන් ඉදිරියේ විකිරණයෙන් පසු සයිටොක්‍රෝම් c2 ඔක්සිකරණ අනුපාතය (අමු දත්ත සඳහා රූපය S8 බලන්න). (F) අඩු, මධ්‍යම හෝ ඉහළ තීව්‍රතා ආලෝකය යටතේ වැඩුණු සෛලවල (පිළිවෙලින් 10, 30 හෝ 300μMm-2 s-1), පිරිසිදු කළ සංකීර්ණයේ ප්‍රෝටීන් W සහ RC-L උප ඒකක සහ වෙන් කරන ලද පටල අනුපාතය. SDS-polyacrylamide ජෙල් ඉලෙක්ට්‍රෝෆොරසිස් සහ ප්‍රතිශක්තිකරණ විශ්ලේෂණය මගින් ප්‍රෝටීන් මට්ටම තීරණය කරන්න (අමු දත්ත සඳහා රූපය S9 බලන්න). පිරිසිදු කරන ලද RC-LH114-W සංකීර්ණයට සාපේක්ෂව අනුපාතය තීරණය කරන්න. සංකීර්ණයේ RC-L සහ ප්‍රෝටීන්-W අතර ස්ටොයිකියෝමිතික අනුපාතය 1:1 වේ.
RC-LH114-W හි විකෘති වූ αβ14 ලූපයේ 1 වන ස්ථානයේ ඇති BChls (රූපය 1, A, C, සහ E) RC-LH116 හි සමාන BChls වලට වඩා 6.8Å කින් RC ප්‍රාථමික දායකයාට (P) සමීප වේ (රූපය 1, B, D, සහ F, සහ රූපය S3); කෙසේ වෙතත්, සංකීර්ණ දෙකෙහි අස්ථිර අවශෝෂණ චාලක විද්‍යාව පෙන්නුම් කරන්නේ RC-LH114-W සහ RC-LH116 සඳහා, LH1 සිට RC දක්වා උද්දීපන ශක්ති හුවමාරු කාල නියතයන් 40 ±4 සහ 44±3 ps බවයි (රූපය 2). , C සහ D, රූපය S4 සහ වගුව S2). RC තුළ ඉලෙක්ට්‍රොනික හුවමාරුවේ සැලකිය යුතු වෙනසක් ද නොමැත (රූපය S5 සහ අදාළ අතිරේක පෙළ). LH1 සහ RC-P අතර ශක්ති හුවමාරු කාලයේ සමීප අනුරූපතාවය LH1 ලූප දෙකෙහි බොහෝ BChl වල සමාන දුර, කෝණය සහ විභව ශක්තිය නිසා ඇති බව අපි සැක කරමු. අවම දුරක් ළඟා කර ගැනීම සඳහා LH1 ශක්ති රටාව ගවේෂණය කිරීම උපප්‍රශස්ත ස්ථාන වලින් RC වෙත සෘජු ශක්ති හුවමාරුවට වඩා වේගවත් නොවන බව පෙනේ. RC-LH114-W හි විවෘත-ලූප් LH1 ලූපය ව්‍යුහාත්මක විශ්ලේෂණය සඳහා අඩු උෂ්ණත්ව තත්ත්වයන් යටතේ නොසැලකිය හැකි තාප චලිතයකට භාජනය විය හැකි අතර, RC 1 ස්ථානයේ βBChls හි වර්ණක දුර සිට කාමර උෂ්ණත්වයේ දී දිගු αβ14 වළලු අනුකූලතාවයක් ඇත.
RC-LH116 සංකීර්ණයේ BChls 32 ක් සහ කැරොටිනොයිඩ් 16 ක් අඩංගු වන අතර, එහි සමස්ත සැකැස්ම Thermochromatium (Tch.) pidpidum [Protein Data Bank (PDB) ID 5Y5S] (9), Thiorhodovibrio (Trv.) 970 strain (PDB ID 7C9R) (12) සහ හරිත ඇල්ගී (Blc.viridis) (PDB ID 6ET5) (10) වලින් ලබාගත් සැකැස්මට සමාන වේ. පෙළගැස්වීමෙන් පසු, αβ heterodimers හි ස්ථානවල කුඩා අපගමනයන් පමණක් නිරීක්ෂණය විය, විශේෂයෙන් 1-5, 15 සහ 16 (රූපය S6). ප්‍රෝටීන්-W පැවතීම LH1 හි ව්‍යුහයට සැලකිය යුතු බලපෑමක් ඇති කරයි. එහි TMH තුන කෙටි ලූප මගින් සම්බන්ධ කර ඇති අතර, සංකීර්ණයේ ලුමෙන් පැත්තේ N-පර්යන්තය සහ සයිටොප්ලාස්මික් පැත්තේ C-පර්යන්තය (රූප 1A සහ 3, A සිට D දක්වා). ප්‍රෝටීන්-W බොහෝ දුරට ජලභීතික වේ (රූපය 3B), සහ TMH2 සහ TMH3 LH1αβ-14 සමඟ අන්තර්ක්‍රියා කර ට්‍රාන්ස්මෙම්බ්‍රේන් මතුපිටක් සාදයි (රූපය 3, B සහ E සිට G දක්වා). අතුරුමුහුණත ප්‍රධාන වශයෙන් ට්‍රාන්ස්මෙම්බ්‍රේන් කලාපයේ Phe, Leu සහ Val අපද්‍රව්‍ය වලින් සමන්විත වේ. මෙම අපද්‍රව්‍ය ජලභීතික ඇමයිනෝ අම්ල සහ αβ-14 වර්ණක සමඟ ගොඩගැසී ඇත. සංකීර්ණ කුහරයේ මතුපිට W-Thr68 සහ β-Trp42 අතර හයිඩ්‍රජන් බන්ධනය ඇතුළුව සමහර ධ්‍රැවීය අපද්‍රව්‍ය අන්තර්ක්‍රියාවට දායක වේ (රූපය 3, F සහ G). සයිටොප්ලාස්මයේ මතුපිට, Gln34 αβ-14 කැරොටිනොයිඩ් වල කීටෝ කාණ්ඩයට යාබදව පිහිටා ඇත. ඊට අමතරව, n-dodecyl β-d-maltoside (β-DDM) අණුව නිරාකරණය කරන ලද අතර, එහි ජලභීතික වලිගය ප්‍රෝටීන්-W සහ αβ-14 අතර අතුරුමුහුණත දක්වා විහිදෙන අතර ලිපිඩ වලිගය ශරීරයේ පිහිටා තිබිය හැක. ප්‍රෝටීන් W සහ RCH හි C-පර්යන්ත විභේදන කලාප ඉතා සමීප බව අපි දුටුවෙමු, නමුත් නිශ්චිත අන්තර්ක්‍රියා සෑදීමේ විෂය පථය තුළ නොවේ (රූපය 1, A සහ ​​E). කෙසේ වෙතත්, මෙම ප්‍රෝටීන දෙකෙහි නොවිසඳුණු C-පර්යන්ත ඇමයිනෝ අම්ලවල අන්තර්ක්‍රියා තිබිය හැකි අතර, එමඟින් RC-LH114-W සංකීර්ණය එකලස් කිරීමේදී ප්‍රෝටීන්-W බඳවා ගැනීම සඳහා යාන්ත්‍රණයක් සැපයිය හැකිය.
(A) කාටූන් ආකාරයෙන් LH1αβ14 සමඟ අතුරුමුහුණතට මුහුණලා ඇති ප්‍රෝටීන්-W, දණ්ඩක හැඩැති පැති දාමයක් (රතු) ඇති අතර, එය විද්‍යුත් ස්ථිතික විභව රූප සටහනේ කොටසක (0.13 සමෝච්ඡ මට්ටමක් සහිත විනිවිද පෙනෙන අළු මතුපිටක්) ප්‍රදර්ශනය කෙරේ. (B) ප්‍රෝටීන්-W ජලභීතික වර්ණවත් මතුපිටකින් නිරූපණය කෙරේ. ධ්‍රැවීය සහ ආරෝපිත ප්‍රදේශ සයන් පැහැයෙන් ද, ජලභීතික ප්‍රදේශ සුදු පැහැයෙන් ද, දැඩි ජලභීතික ප්‍රදේශ තැඹිලි පැහැයෙන් ද දැක්වේ. (C සහ D) කාටූනයේ නිරූපණය වන ප්‍රෝටීන්-W, එහි දිශානතිය (A) (C) හි මෙන් සමාන වන අතර 180° (D) කින් භ්‍රමණය වේ. අනුපිළිවෙලෙහි පිහිටීම අනුව, වෙන්කර හඳුනාගත හැකි අපද්‍රව්‍ය දේදුන්න වර්ණ පටිපාටියක් අනුගමනය කරයි, එහිදී N-පර්යන්තය නිල් වන අතර C-පර්යන්තය රතු වේ. (E) (A) හි ඇති ආකාරයටම ප්‍රෝටීන්-W, සහ ප්‍රෝටීන්-W:LH1 අතුරුමුහුණතේ ඇති අපද්‍රව්‍ය අමුණා ඇති සලකුණු සහිත දඬු මගින් නිරූපණය කෙරේ. (F) කාටූන් නිරූපණයේදී (E) සහ LH1αβ14 ට සාපේක්ෂව සහ තීරු නිරූපණයේදී අතුරුමුහුණත් අපද්‍රව්‍යවලට සාපේක්ෂව ප්‍රෝටීන්-W 90° කින් භ්‍රමණය වේ. බීටා පොලිපෙප්ටයිඩයෙන් එල්ලෙන අපද්‍රව්‍ය ලේබල් කර ඇත. සහකාරකය රූපය 1 හි වර්ණයට ගැලපෙන තීරුවක් ලෙසත්, දිරාපත් වූ β-DDM අළු පැහැයෙන් සහ ඔක්සිජන් රතු පැහැයෙන්ත් දක්වා ඇත. (G) (F) හි දර්ශනය ලේබල් කරන ලද ඇල්ෆා පොලිපෙප්ටයිඩයේ කැපී පෙනෙන අපද්‍රව්‍ය සමඟ 180° කින් භ්‍රමණය වේ.
ප්‍රෝටීන්-W αβ විෂම dimer එකක් (රූපය 1F හි 15 වන) ප්‍රතිස්ථාපනය කරයි, එමඟින් ලූප් වැසීම සහ පළමු αβ විෂම dimer තුන ඇලවීම වළක්වයි. පළමු αβ-1 විෂම dimer හි උපරිම නැඹුරු කෝණය පටල සාමාන්‍යයට සාපේක්ෂව 25° සිට 29° දක්වා වූ බව නිරීක්ෂණය විය (රූපය 1, A සහ ​​E), එය RC A තියුණු ප්‍රතිවිරුද්ධතාව-LH116 හි αβ-1 හි 2° සිට 8° දක්වා නැඹුරුව මගින් සෑදී ඇත (රූපය 1, B සහ F). දෙවන සහ තෙවන විෂම dimer පිළිවෙලින් 12° සිට 22° දක්වා සහ 5° සිට 10° දක්වා නැඹුරු වේ. RC හි ස්ටීරික් බාධාව හේතුවෙන්, αβ-1 හි ඇලවීමට αβ හි දෙවන යුගලය ඇතුළත් නොවේ (රූපය 1F හි 16 වන αβ ට අනුරූප වන), එමඟින් LH1 වළල්ලේ පැහැදිලි පරතරයක් සාදයි (රූපය 1, A සහ ​​E). αβ විෂම dimer දෙකක් නොමැතිකම නිසා, BChl හතරක් සහ කැරොටිනොයිඩ් දෙකක් අහිමි වීමත් සමඟ, කැරොටිනොයිඩ් කිසිවක් ඇඹරුණු αβ-1 උප ඒකකයට බන්ධනය නොවන අතර, එහි ප්‍රතිඵලයක් ලෙස කැරොටිනොයිඩ් 13ක් Vegetarian සහ BChls 28ක් අඩංගු LH114-W වළල්ලක් ඇති වේ. αβ1 සිට 7 දක්වා කලාපවල සංකීර්ණ දෙකෙහි දේශීය විභේදන ඇස්තමේන්තු LH1 ලූපයේ ඉතිරි කොටස් වලට වඩා අඩුය, එය RC QB අඩවියට යාබදව ඇති LH1 උප ඒකකයේ ආවේණික ප්ලාස්ටික් බව පිළිබිඹු කළ හැකිය (රූපය 4).
RC-LH114-W (A සහ B) සහ RC-LH116 (C සහ D) හි පින්තූර රූපය 1 (B සහ D) හි එකම ඉහළ දර්ශනය/පැති දර්ශනය (A සහ B) (A සහ C) සහ කුහර මතුපිටින් දැක්වේ. වර්ණවත් යතුරු දකුණු පසින් දක්වා ඇත.
1:14 ස්ටොයිකියෝමිතික අනුපාතයක් සහිත අනෙක් එකම ලාක්ෂණික හර සංකීර්ණය වන්නේ රොඩොකොකස් ස්ෆෙරොයිඩ්ස් (Rba.) RC-LH1-PufX ඩයිමර් (13) ය. කෙසේ වෙතත්, ප්‍රෝටීන් W සහ PufX වලට පැහැදිලි සමජාතීයතාවයක් නොමැති අතර, ඒවායේ අදාළ LH1 ව්‍යුහයන් කෙරෙහි සැලකිය යුතු බලපෑමක් ඇති කරයි. PufX යනු Rps. palustris LH116αβ-16 ට අනුරූප ස්ථානයක RC-H උප ඒකකයේ (13) සයිටොප්ලාස්මික් පැත්ත සමඟ අන්තර්ක්‍රියා කරන N-පර්යන්ත සයිටොප්ලාස්මික් වසමක් සහිත තනි TMH වේ. PufX RC-LH1 සහ සයිටොක්‍රෝම් bcl සංකීර්ණය අතර ක්විනෝන්/ක්විනොලෝන් හුවමාරුව සඳහා නාලිකාවක් නිර්මාණය කරන අතර සියලුම Rba. ස්ෆෙරොයිඩ්ස් හර සංකීර්ණයේ (13) පවතී. මොනෝමර්-මොනෝමර් අතුරුමුහුණත Rba හි ඇතත්. RC-LH114-W හි ප්‍රෝටීන් W හි බන්ධන ස්ථානයේ ස්පෙරොයිඩ් RC-LH1-PufX ඩයිමර් පිහිටා ඇති අතර, PufX සහ ප්‍රෝටීන්-W මගින් ප්‍රේරණය වන පරතරය සමාන ස්ථානයක පවතී (රූපය S7A). RC-LH114-W හි පරතරය ද ප්‍රෝටීන් W හෝ PufX (රූපය S7B) හා සම්බන්ධ නොවන පෙප්ටයිඩ මගින් සෑදී ඇති Pseudomonas rosea LH1 හි උපකල්පිත ක්විනෝන් නාලිකාව (8) සමඟ පෙළගැසී ඇත. ඊට අමතරව, Blc හි ක්විනෝන් නාලිකාව. එක් γ උප ඒකකයක් (7) බැහැර කිරීමෙන් සාදන ලද මරකත කොළ LH1 සමාන ස්ථානයක පිහිටා ඇත (රූපය S7C). විවිධ ප්‍රෝටීන මගින් මැදිහත් වුවද, RC-LH1 සංකීර්ණයේ පොදු ස්ථානයක මෙම ක්විනෝන්/ක්විනෝලෝල් නාලිකා පෙනුම අභිසාරී පරිණාමයේ උදාහරණයක් ලෙස පෙනේ, එයින් පෙන්නුම් කරන්නේ ප්‍රෝටීන් W මගින් නිර්මාණය කරන ලද පරතරය ක්විනෝන් නාලිකාවක් ලෙස ක්‍රියා කළ හැකි බවයි.
LH114-W ලූපයේ පරතරය, ප්‍රෝටීන වල මෙන් ප්‍රෝටීන් සිදුරක් හරහා වසම් දෙක සම්බන්ධ කරනවාට වඩා, RC-LH114-W සංකීර්ණයේ අභ්‍යන්තර අවකාශය සහ තොග පටලය අතර අඛණ්ඩ පටල කලාපයක් සෑදීමට ඉඩ සලසයි (රූපය 1G). RC-LH116 සංකීර්ණය සංවෘත Tch එකකට සමාන වේ. ඉඳිකටුවක් වැනි සංකීර්ණය (22) (රූපය 1H). පටලය හරහා ක්විනෝන් විසරණය පටු ප්‍රෝටීන් නාලිකාව හරහා විසරණයට වඩා වේගවත් බැවින්, විවෘත LH114-W ලූපයට සංවෘත LH116 ලූපයට වඩා වේගවත් RC පිරිවැටුමකට ඉඩ දිය හැකි අතර, RC තුළට ක්විනෝන් විසරණය වඩාත් සීමා කළ හැකිය. ප්‍රෝටීන් W, RC හරහා ක්විනෝන් පරිවර්තනයට බලපාන්නේද යන්න පරීක්ෂා කිරීම සඳහා, අපි ubiquinone 2 (UQ2) හි නිශ්චිත සාන්ද්‍රණයක් (ස්වාභාවික UQ10 හි ප්‍රතිසමයක්) මත සයිටොක්‍රෝම් ඔක්සිකරණ පරීක්ෂණයක් සිදු කළෙමු (රූපය 2E). චෙලේටඩ් ක්විනෝන් පැවතීම දෘශ්‍ය මයිකලිස් නියතය නිවැරදිව තීරණය කිරීමට බාධාවක් වුවද (RC-LH114-W සහ RC-LH116 පිළිවෙලින් 0.2±0.1μM සහ 0.5±0.2μM සඳහා සුදුසු වේ), RC-LH114-W හි උපරිම අනුපාතය (4.6±0.2 e-RC-1 s-1) RC-LH116 (3.6±0.1 e-RC-1 s-1) ට වඩා 28±5% විශාලය.
අපි මුලින් ඇස්තමේන්තු කළේ ප්‍රෝටීන්-W මූලික සංකීර්ණයෙන් 10% ක් පමණ පවතින බවයි (16); මෙහිදී, අඩු ආලෝක, මධ්‍යම ආලෝක සහ ඉහළ ආලෝක වර්ධන සෛලවල පදිංචි වීමේ අනුපාත පිළිවෙලින් 15±0.6%, 11±1% සහ 0.9±0.5 වේ (රූපය 2F). ස්කන්ධ වර්ණාවලීක්ෂයේ ප්‍රමාණාත්මක සංසන්දනයෙන් පෙන්නුම් කළේ හිස්ටයිඩින් ටැගය එකතු කිරීම වල් වර්ගයේ වික්‍රියා (P = 0.59) හා සසඳන විට ප්‍රෝටීන්-W හි සාපේක්ෂ බහුලත්වය අඩු නොකළ බවයි, එබැවින් මෙම මට්ටම් වෙනස් කරන ලද ප්‍රෝටීන්-W හි කෞතුක වස්තුවක් නොවේ (රූපය S10). කෙසේ වෙතත්, RC-LH1 සංකීර්ණයේ ප්‍රෝටීන්-W හි මෙම අඩු පදිංචි වීම සමහර RC වලට වේගවත් අනුපාතයකින් පෙරළීමට ඉඩ දිය හැකි අතර එමඟින් RC-LH116 සංකීර්ණයේ මන්දගාමී ක්විනෝන්/ක්විනොලෝන් හුවමාරුව අවම කරයි. ඉහළ ආලෝක පදිංචි අනුපාතය මෑත කාලීන පිටපත් කිරීමේ දත්ත සමඟ නොගැලපෙන බව අපි දුටුවෙමු, එයින් පෙන්නුම් කරන්නේ pufW ජාන ප්‍රකාශනය ශක්තිමත් ආලෝකය යටතේ වැඩි වන බවයි (රූපය S11) (23). pufW පිටපත් කිරීම සහ ප්‍රෝටීන්-W RC-LH1 සංකීර්ණයට ඇතුළත් කිරීම අතර වෙනස ව්‍යාකූල වන අතර ප්‍රෝටීනයේ සංකීර්ණ නියාමනය පිළිබිඹු කළ හැකිය.
RC-LH114-W හි, කාඩියොලිපින් (CDL) 6 ක්, ෆොස්ෆැටයිඩයිල්කොලීන් (POPC) 7 ක්, ෆොස්ෆැටයිඩයිල්ග්ලිසරෝල් (POPG) 1 ක් සහ β-DDM අණු 29 ක් වෙන් කර එහි ආකෘතිගත කර ඇත. CDL 6 ක්, POPC 24 ක්, POPG 2 ක් සහ βDDM 12 ක්. RC-LH116 (රූපය 5, A සහ ​​B). මෙම ව්‍යුහ දෙකෙහිම, CDL සංකීර්ණයේ සයිටොප්ලාස්මික් පැත්තේ පාහේ පිහිටා ඇති අතර, POPC, POPG සහ β-DDM බොහෝ දුරට ලුමිනල් පැත්තේ පිහිටා ඇත. ලිපිඩ සහ ඩිටර්ජන්ට් අණු දෙකක් RC-LH114-W සංකීර්ණයේ αβ-1 සිට αβ-6 කලාපයේ හුදකලා කරන ලද අතර (රූපය 5A), RC-LH116 හි සමාන කලාපයේ පහක් හුදකලා කරන ලදී (රූපය 5B). සංකීර්ණයේ අනෙක් පැත්තෙන් තවත් ලිපිඩ හමු විය, ප්‍රධාන වශයෙන් CDL, RC සහ αβ-7 සිට αβ-13 දක්වා එකතු වී ඇත (රූපය 5, A සහ ​​B). අනෙකුත් ව්‍යුහාත්මකව විසඳන ලද ලිපිඩ සහ ඩිටර්ජන්ට් LH1 වළල්ලෙන් පිටත පිහිටා ඇති අතර, හොඳින් විසඳන ලද ඇසයිල් දාම LH1 උප ඒකක අතර විහිදේ, තාවකාලිකව RC-LH114-W හි β-DDM ලෙස නම් කර ඇති අතර RC හි β-DDM ලෙස අර්ථ දක්වා ඇත. β-DDM සහ POPC-LH116 මිශ්‍රණයකි. අපගේ ව්‍යුහයේ චෙලාටින් ලිපිඩ සහ ඩිටර්ජන්ට් වල සමාන ස්ථාන පෙන්නුම් කරන්නේ ඒවා භෞතික විද්‍යාත්මකව අදාළ බන්ධන ස්ථාන බවයි (රූපය S12A). Tch හි සමාන අණු වල පිහිටීම් ද හොඳ අනුකූලතාවක් ඇත. මෘදු සහ Trv. වික්‍රියා 970 RC-LH1s (රූපය S12, B සිට E දක්වා) (9, 12) සහ ලිපිඩ ප්‍රධාන කාණ්ඩයේ හයිඩ්‍රජන්-බන්ධන අපද්‍රව්‍ය අනුක්‍රමික පෙළගැස්මේදී තරමක් හොඳ සංරක්ෂණය පෙන්නුම් කළේය (රූපය S13), RC (24) සමඟ බන්ධනය වන සංරක්ෂිත CDL, මෙම ස්ථාන RC-LH1 සංකීර්ණය තුළ සංරක්ෂණය කළ හැකි බව පෙන්නුම් කරයි.
(A සහ B) RC-LH114-W (A) සහ RC-LH116 (B) පෙප්ටයිඩ කාටූන් මගින් නිරූපණය කර ඇති අතර, වර්ණක දඬු මගින් නිරූපණය කර ඇති අතර, රූපය 1 හි වර්ණ පටිපාටිය භාවිතා කරයි. ලිපිඩ රතු පැහැයෙන් දක්වා ඇති අතර, ඩිටර්ජන්ට් අළු පැහැයෙන් දක්වා ඇත. RC QA සහ QB අඩවි වලට බැඳී ඇති UQ කහ පැහැයෙන් යුක්ත වන අතර හුදකලා UQ නිල් පැහැයෙන් යුක්ත වේ. (C සහ D) ලිපිඩ ඉවත් කර ඇති (A) සහ (B) හා සමාන දසුන්. (E සිට G දක්වා) RC-LH116 සිට Q1(E), Q2(F) සහ Q3(G) හි විශාල කළ දසුන, එකිනෙකට බලපෑම් කරන පැති දාම සමඟ. හයිඩ්‍රජන් බන්ධන කළු ඉරි සහිත රේඛා ලෙස දැක්වේ.
RC-LH116 හි, ආරෝපණ වෙන් කිරීමේ ක්‍රියාවලියේදී ඉලෙක්ට්‍රෝන හුවමාරුවට සහභාගී වන RC QA සහ QB UQ යන දෙකම ඒවායේ බන්ධන ස්ථානවල දිරාපත් වේ. කෙසේ වෙතත්, RC-LH114-W හි, QB ක්විනෝනය විසඳා නොමැති අතර පහත විස්තරාත්මකව සාකච්ඡා කරනු ඇත. QA සහ QB ක්විනෝන වලට අමතරව, චෙලේටඩ් UQ අණු දෙකක් (RC සහ LH1 වළලු අතර පිහිටා ඇත) RC-LH114-W ව්‍යුහය තුළ ඒවායේ හොඳින් විසඳන ලද ප්‍රධාන කණ්ඩායම් අනුව වෙන් කර ඇත (පිළිවෙලින් Q1 සහ Q2 හි පිහිටා ඇත). අවකාශය). රූපය 5C). අයිසොප්‍රීන් ඒකක දෙකක් Q1 වෙත පවරා ඇති අතර, ඝනත්ව සිතියම Q2 හි සම්පූර්ණ අයිසොප්‍රීන් වලිග 10 විසඳයි. RC-LH116 හි ව්‍යුහය තුළ, චෙලේටඩ් UQ10 අණු තුනක් (Q1 සිට Q3 දක්වා, රූපය 5D) විසඳා ඇති අතර, සියලුම අණු වලිගය පුරා පැහැදිලි ඝනත්වයක් ඇත (රූපය 5, D සිට G දක්වා). ව්‍යුහ දෙකෙහි, Q1 සහ Q2 හි ක්විනෝන් ප්‍රධාන කාණ්ඩවල පිහිටීම් විශිෂ්ට අනුකූලතාවයක් ඇත (රූපය S12F), ඒවා අන්තර්ක්‍රියා කරන්නේ RC සමඟ පමණි. Q1 පිහිටා ඇත්තේ RC-LH114-W හි W පරතරයේ දොරටුවේ ය (රූපය 1G සහ 5, C, D සහ E), සහ Q2 පිහිටා ඇත්තේ QB බන්ධන අඩවිය අසල ය (රූපය 5, C, D) සහ F). සංරක්ෂිත L-Trp143 සහ L-Trp269 අපද්‍රව්‍ය Q1 සහ Q2 ට ඉතා ආසන්න වන අතර විභව π-ස්ටැකින් අන්තර්ක්‍රියා සපයයි (රූපය 5, E සහ F, සහ රූපය S12). Q1 හි දුරස්ථ ඔක්සිජන් වලින් 3.0 Å L-Gln88, ශක්තිමත් හයිඩ්‍රජන් බන්ධනයක් සපයයි (රූපය 5E); මෙම අපද්‍රව්‍ය වඩාත්ම දුරස්ථ සම්බන්ධතාවය හැර අනෙකුත් සියලුම RC වල සංරක්ෂණය කර ඇත (රූපය S13). අනෙකුත් බොහෝ RC වල Thr සඳහා L-Ser91 ගතානුගතිකව ආදේශ කර ඇත (රූපය S13), Q1 හි මෙතිල් ඔක්සිජන් වලින් ඇන්ග්ස්ට්‍රෝම් 3.8 ක් වන අතර දුර්වල හයිඩ්‍රජන් බන්ධන සැපයිය හැකිය (රූපය 5E). Q3 නිශ්චිත අන්තර්ක්‍රියාවක් ඇති බවක් නොපෙනේ, නමුත් RC-M උප ඒකකය සහ LH1-α උප ඒකකය 5 සිට 6 දක්වා (රූපය 5, D සහ G) අතර ජලභීතික කලාපයේ පිහිටා ඇත. Q1, Q2 සහ Q3 හෝ අසල ඇති චෙලේටඩ් ක්විනෝන් ද Tch. Gentle, Trv. Strain 970 සහ Blc හි විසඳා ඇත. අයිරිස් ව්‍යුහය (9, 10, 12) RC-LH1 සංකීර්ණයේ සංරක්ෂිත සහායක ක්විනෝන් බන්ධන ස්ථානයක් වෙත යොමු කරයි (රූපය S12G). RC-LH116 හි දිරාපත් වූ UQ පහ, ඉහළ කාර්යසාධනයක් සහිත ද්‍රව වර්ණදේහ විද්‍යාව (HPLC) මගින් තීරණය කරනු ලබන සෑම සංකීර්ණයකම 5.8±0.7 සමඟ හොඳ එකඟතාවයකින් යුක්ත වන අතර, RC-LH114-W හි දිරාපත් වූ UQ තුන මනින ලද අගය වන 6.2±0.3 ට වඩා අඩුය (රූපය S14) ව්‍යුහයේ නොවිසඳුණු UQ අණු ඇති බව පෙන්නුම් කරයි.
ව්‍යාජ සමමිතික L සහ M පොලිපෙප්ටයිඩ වල TMH පහක් අඩංගු වන අතර BChl ඩයිමර් එකක්, BChl මොනෝමර් දෙකක්, බැක්ටීරියාභක්ෂක (BPh) මොනෝමර් දෙකක් සහ හේම් නොවන යකඩ එකක් සහ UQ10 අණු එකක් හෝ දෙකක් ඒකාබද්ධ කරන විෂමඩයිමරයක් සාදයි. පර්යන්ත කීටෝන් කාණ්ඩයේ හයිඩ්‍රජන් බන්ධන පැවතීම සහ Rps හි එහි දන්නා සමුච්චය හරහා, කැරොටිනොයිඩ් M-උප ඒකකයට ඇතුළත් වේ, එය cis-3,4-dehydroorhodopin ලෙස නම් කර ඇත. විශේෂ (25). RC-H හි පිටත පටල වසම තනි TMH මගින් පටලයට නැංගුරම් ලා ඇත. සමස්ත RC ව්‍යුහය අදාළ විශේෂ තුනේ (Rba) උප ඒකක RC වලට සමාන වේ. sphaeroides (PDB ID: 3I4D). BChl සහ BPh වල සාර්ව චක්‍ර, කැරොටිනොයිඩ් කොඳු නාරටිය සහ හීම් නොවන යකඩ මෙම ව්‍යුහයන්ගේ විභේදන පරාසය තුළ අතිච්ඡාදනය වේ, QA අඩවියේ UQ10 ප්‍රධාන කණ්ඩායම සහ RC-LH116 හි QB ක්විනෝනය මෙන් (රූපය S15).
විවිධ QB අඩවි පදිංචි අනුපාත සහිත RC ව්‍යුහ දෙකක් තිබීම, QB ක්විනෝන් බන්ධනය සමඟ ඇති ස්ථාවර අනුකූලතා වෙනස්කම් පරීක්ෂා කිරීමට නව අවස්ථාවක් සපයයි. RC-LH116 සංකීර්ණයේ, QB ක්විනෝනය සම්පූර්ණයෙන්ම බැඳී ඇති "සමීප" ස්ථානයේ (26) පිහිටා ඇත, නමුත් RC-LH114-W වෙන් කිරීමේදී QB ක්විනෝනය නොමැත. RC-LH114-W හි QB ක්විනෝනයක් නොමැත, එය පුදුමයට කරුණකි, මන්ද සංකීර්ණය ක්‍රියාකාරී වන අතර, ව්‍යුහාත්මකව විසඳන ලද QB ක්විනෝනයක් සහිත RC-LH116 සංකීර්ණයට වඩා. LH1 මුදු දෙක ක්විනෝන හයක් පමණ චේලේට් කළද, පහක් සංවෘත RC-LH116 වළල්ලේ ව්‍යුහාත්මකව විසඳනු ලබන අතර, විවෘත RC-LH114-W වළල්ලේ ව්‍යුහාත්මකව සීමිත වන්නේ තුනක් පමණි. මෙම වැඩිවන ව්‍යුහාත්මක ආබාධය RC-LH114-W QB අඩවි වේගයෙන් ප්‍රතිස්ථාපනය කිරීම, සංකීර්ණයේ වේගවත් ක්විනෝන් චාලක විද්‍යාව සහ LH1 ලූපය තරණය කිරීමේ වැඩි සම්භාවිතාව පිළිබිඹු කළ හැකිය. RC-LH114-W හි RC QB අඩවියේ UQ නොමැතිකම වඩාත් සංකීර්ණ හා ක්‍රියාකාරී සංකීර්ණයක ප්‍රතිඵලයක් විය හැකි බවත්, RC-LH114-W හි QB අඩවිය UQ පිරිවැටුමෙන් වහාම කැටි කර ඇති බවත් අපි යෝජනා කරමු. නිශ්චිත අදියර (QB අඩවියට පිවිසීම වසා දමා ඇත) මෙම ක්‍රියාකාරකමේ අනුකූලතාව පිළිබිඹු කරයි.
QB නොමැතිව, L-Phe217 හි UQ10 බන්ධනයට නොගැලපෙන ස්ථානයකට භ්‍රමණය වීම, මන්ද එය වලිගයේ පළමු අයිසොප්‍රීන් ඒකකය සමඟ අවකාශීය ගැටුමක් ඇති කරන බැවිනි (රූපය 6A). ඊට අමතරව, පැහැදිලි ප්‍රධාන අනුකූලතා වෙනස්කම් පැහැදිලිය, විශේෂයෙන් හෙලික්ස් ඩි (TMH D සහ E අතර ලූපයේ කෙටි හෙලික්ස්) එහිදී L-Phe217 QB බන්ධන සාක්කුවට මාරු කර L-Tyr223 හි භ්‍රමණය (රූපය 6A) M-Asp45 රාමුව සමඟ හයිඩ්‍රජන් බන්ධනය බිඳ දැමීමට සහ QB බන්ධන අඩවියේ දොරටුව වසා දැමීමට (රූපය 6B). හෙලික්ස් එහි පාදයේ හැරීම්, L-Ser209 හි Cα 0.33Å කින් මාරු කර ඇති අතර, L-Val221Cα 3.52Å කින් මාරු කර ඇත. TMH D සහ E හි නිරීක්ෂණය කළ හැකි වෙනස්කම් නොමැත, ඒවා ව්‍යුහ දෙකෙහිම අධිස්ථාපනය කළ හැකිය (රූපය 6A). අප දන්නා පරිදි, මෙය QB අඩවිය වසා දමන ස්වභාවික RC හි පළමු ව්‍යුහයයි. සම්පූර්ණ (QB-බන්ධිත) ව්‍යුහය සමඟ සංසන්දනය කිරීමෙන් පෙනී යන්නේ ක්විනෝනය අඩු කිරීමට පෙර, එය ක්විනෝනයට ඇතුළු වීමට අනුකූල වෙනසක් අවශ්‍ය බවයි. L-Phe217 භ්‍රමණය වී ක්විනෝන් ප්‍රධාන කණ්ඩායම සමඟ π-ස්ටැකින් අන්තර්ක්‍රියාවක් ඇති කරන අතර, හෙලික්ස් පිටතට මාරු වන අතර, L-Gly222 හි ඇටසැකිල්ල සහ L-Tyr223 හි පැති දාමය ස්ථාවර හයිඩ්‍රජන් බන්ධන ව්‍යුහයක් සහිත හයිඩ්‍රජන් බන්ධන ජාලයක් සෑදීමට ඉඩ සලසයි (රූපය 6, A සහ ​​C).
(A) හොලෝග්‍රෑම් (L දාමය, තැඹිලි/M දාමය, මැජෙන්ටා) සහ අපෝ (අළු) ව්‍යුහයේ අතිච්ඡාදනය වන කාටූනය, එහි යතුරු අපද්‍රව්‍ය දණ්ඩක් වැනි නිරූපණයක ස්වරූපයෙන් ප්‍රදර්ශනය කෙරේ. UQ10 කහ තීරුවකින් නිරූපණය කෙරේ. තිත් රේඛාව සමස්ත ව්‍යුහය තුළම සෑදී ඇති හයිඩ්‍රජන් බන්ධන දක්වයි. (B සහ C) ඇපොලිපොප්‍රෝටීනයේ සහ සම්පූර්ණ වළලු ව්‍යුහයේ මතුපිට නිරූපණය, පිළිවෙලින් නිල් පැහැයෙන් L-Phe217 සහ රතු පැහැයෙන් L-Tyr223 හි පැති දාම ඔක්සිජන් ඉස්මතු කරයි. L උප ඒකකය තැඹිලි පාටයි; M සහ H උප ඒකක වර්ණ ගැන්වී නැත. (D සහ E) ඇපොලිපොප්‍රෝටීන (D) සහ සම්පූර්ණ (E) RC QB අඩවි [පිළිවෙලින් (A) අනුව වර්ණය] සහ තර්මොෆිලස් තර්මොෆිලස් PSII (කොළ, නිල් ප්ලාස්ටික් ක්විනෝන් සමඟ; PDB ID: 3WU2) පෙළගස්වන්න (58).
අනපේක්ෂිත ලෙස, LH1 නොමැතිව QB-ඌනතාවයෙන් පෙළෙන RC වල ව්‍යුහයන් කිහිපයක් ලබා ගත හැකි වුවද, මෙම අධ්‍යයනයේ නිරීක්ෂණය කරන ලද අනුකූලතා වෙනස්කම් මීට පෙර වාර්තා වී නොමැත. මේවාට Blc. viridis (PDB ID: 3PRC) (27), Tch. tepidum (PDB ID: 1EYS) (28) සහ Rba. sphaeroides (PDB ID: 1OGV) (29) වලින් ලබාගත් QB ක්ෂය වීමේ ව්‍යුහය ඇතුළත් වන අතර, මේ සියල්ල ඒවායේ සමස්ත QB ව්‍යුහයට සමාන වේ. 3PRC සමීපව පරීක්ෂා කිරීමේදී හෙළි වූයේ LDAO (ලෝරයිල් ඩයිමෙතිල් ඇමයින් ඔක්සයිඩ්) ඩිටර්ජන්ට් අණු QB ස්ථානයේ දොරටුවේදී බන්ධනය වන අතර එමඟින් සංවෘත අනුකූලතාවයකට නැවත සකස් කිරීම වළක්වා ගත හැකිය. 1EYS හෝ 1OGV හි එකම ස්ථානයේ LDAO දිරාපත් නොවුනත්, මෙම RC එකම ඩිටර්ජන්ට් භාවිතයෙන් සකස් කර ඇති අතර එම නිසා එකම බලපෑමක් ඇති කළ හැකිය. Rba හි ස්ඵටික ව්‍යුහය. සයිටොක්‍රෝම් c2 (PDB ID: 1L9B) සමඟ සම-ස්ඵටිකීකරණය කරන ලද ස්ෆෙරොයිඩ්ස් RC ද සංවෘත QB අඩවියක් ඇති බව පෙනේ. කෙසේ වෙතත්, මෙම අවස්ථාවේදී, RC-M පොලිපෙප්ටයිඩයේ N-පර්යන්ත කලාපය (Q හෙලික්සයේ ටයිර් අවශේෂයේ H බන්ධනය හරහා QB බන්ධන අඩවිය සමඟ අන්තර් ක්‍රියා කරයි) අස්වාභාවික අනුකූලතාවයක් අනුගමනය කරන අතර, QB අනුකූලතා වෙනස තවදුරටත් ගවේෂණය නොකෙරේ (30). සහතික කළ හැකි දෙය නම්, RC-LH114-W ව්‍යුහය තුළ M පොලිපෙප්ටයිඩයේ මෙවැනි විරූපණයක් අප දැක නොමැති බවයි, එය RC-LH116 RC හි N-පර්යන්ත කලාපයට බොහෝ දුරට සමාන වේ. ඩිටර්ජන්ට් මත පදනම් වූ LH1 ඇන්ටෙනාව මුලිනුපුටා දැමීමෙන් පසු, PDB හි ඇපොලිපොප්‍රෝටීන් RCs නිරාකරණය කරන ලද අතර, එමඟින් RC සහ අවට LH1 වළල්ලේ අභ්‍යන්තර පෘෂ්ඨය අතර පරතරයේ ඇති අභ්‍යන්තර ක්විනෝන් තටාක සහ ලිපිඩ ඉවත් කරන ලද බව ද සැලකිල්ලට ගත යුතුය (31, 32). RC ක්‍රියාකාරීව පවතින්නේ එය දිරාපත් විය හැකි QB ක්විනෝන් හැර අනෙකුත් සියලුම සහ සාධක රඳවා තබා ගන්නා බැවිනි, එය අඩු ස්ථායී වන අතර බොහෝ විට සකස් කිරීමේ ක්‍රියාවලියේදී නැති වී යයි (33). ඊට අමතරව, LH1 සහ ස්වාභාවික චක්‍රීය ලිපිඩ RC වලින් ඉවත් කිරීම ආරෝපණයෙන් වෙන් වූ P+QB-තත්වයේ කෙටි ආයු කාලය වැනි කාර්යයන් කෙරෙහි බලපෑමක් ඇති කළ හැකි බව දන්නා කරුණකි (31, 34, 35). එබැවින්, RC වටා ඇති දේශීය LH1 වළල්ලේ පැවැත්ම "සංවෘත" QB අඩවිය පවත්වා ගෙන යා හැකි බවත්, එමඟින් QB අසල දේශීය පරිසරය ආරක්ෂා කළ හැකි බවත් අපි අනුමාන කරමු.
ඇපොලිපොප්‍රෝටීන් (QB ක්විනෝන් නොමැතිව) සහ සම්පූර්ණ ව්‍යුහය QB අඩවියේ පිරිවැටුමේ ස්නැප්ෂොට් දෙකක් පමණක් නියෝජනය කළත්, සිදුවීම් මාලාවක් වෙනුවට, හයිඩ්‍රොක්විනෝන් මගින් නැවත බන්ධනය වීම වැළැක්වීම සඳහා බන්ධනය ගේට් කළ හැකි බවට ඇඟවීම් තිබේ. ඇපොලිපොප්‍රෝටීන වල QB අඩවිය අසල ක්විනෝලෝල් සහ ක්විනෝන් අන්තර්ක්‍රියා වෙනස් විය හැකි අතර, එය RC මගින් එය ප්‍රතික්ෂේප කිරීමට හේතු වේ. ක්විනෝන් බන්ධනය සහ අඩු කිරීම සඳහා අනුකූලතා වෙනස්කම් භූමිකාවක් ඉටු කරන බව දිගු කලක් තිස්සේ යෝජනා කර ඇත. අඳුරු අනුවර්තනයකින් පසු ක්විනෝන් අඩු කිරීමට ශීත කළ RC වලට ඇති හැකියාව දුර්වල වේ (36); එක්ස් කිරණ ස්ඵටික විද්‍යාවෙන් පෙන්නුම් කරන්නේ මෙම හානිය සිදුවන්නේ QB ක්විනෝන් ක්‍රියාකාරී සමීප ස්ථානයේ සිට 4.5 Å පමණ "දුරස්ථ" අනුකූලතාවයක සිරවී සිටීම නිසා බවයි (26), 37). මෙම දුරස්ථ බන්ධන අනුකූලතාවය ඇපොලිපොප්‍රෝටීන් සහ සම්පූර්ණ වළලු ව්‍යුහය අතර අතරමැදි තත්වයේ සැණෙකින් එකක් වන අතර එය ක්විනෝන් සමඟ ආරම්භක අන්තර්ක්‍රියාවෙන් සහ QB අඩවිය විවෘත කිරීමෙන් පසුව සිදුවන බවයි.
ඇතැම් ෆොටෝට්‍රොෆික් බැක්ටීරියා සහ සයනොබැක්ටීරියා, ඇල්ගී සහ ශාකවල PSII සංකීර්ණයේ දක්නට ලැබෙන II වර්ගයේ RC ව්‍යුහාත්මක සහ ක්‍රියාකාරී සංරක්ෂණය ඇත (38). රූපය 6 (D සහ E) හි පෙන්වා ඇති ව්‍යුහාත්මක පෙළගැස්ම PSII RCs සහ බැක්ටීරියා RC සංකීර්ණයේ QB අඩවිය අතර සමානකම අවධාරණය කරයි. මෙම සංසන්දනය දිගු කලක් තිස්සේ ක්විනෝන් බන්ධනය සහ අඩු කිරීමේ සමීපව සම්බන්ධ පද්ධති අධ්‍යයනය කිරීම සඳහා ආදර්ශයක් වී ඇත. පෙර ප්‍රකාශන යෝජනා කළේ අනුකූලතා වෙනස්කම් ක්විනෝන් PSII අඩු කිරීම සමඟ ඇති බවයි (39, 40). එබැවින්, RC හි පරිණාමීය සංරක්ෂණය සලකා බලන විට, ඔක්සිජන් සහිත ෆොටෝට්‍රොෆික් ශාකවල PSII RC හි QB අඩවියට ද මෙම කලින් නිරීක්ෂණය නොකළ බන්ධන යාන්ත්‍රණය අදාළ විය හැකිය.
Rps ΔpufW (ලේබල් නොකළ pufW මකාදැමීම) සහ PufW-His (C-terminal 10x His-tagged protein-W ස්වභාවික pufW locus) වික්‍රියා වලින් ප්‍රකාශ වේ. palustris CGA009 අපගේ පෙර කාර්යයේ (16) විස්තර කර ඇත. මෙම වික්‍රියා සහ සමස්ථානික වල්-වර්ගයේ මව්පියන් ශීතකරණයෙන් ලබා ගන්නා ලද්දේ PYE (එක් එක් ග්‍රෑම් 5 ලීටර් -1) මත සෛල කුඩා සංඛ්‍යාවක් ඉරීමෙනි (LB හි -80 °C හි ගබඩා කර ඇත, 50% (w/v) ග්ලිසරෝල්) ප්‍රෝටීන්, යීස්ට් සාරය සහ සුචිනේට් අඩංගු වේ) agar [1.5% (w/v)] තහඩුව. නිර්වායු තත්වයන් යටතේ කාමර උෂ්ණත්වයේ දී අඳුරේ එක රැයකින් තහඩුව පුර්ව ලියාපදිංචි කරන ලද අතර, පසුව OSRAM 116-W හැලජන් බල්බ (RS සංරචක, UK) මඟින් සපයන ලද සුදු ආලෝකයෙන් (~50 μmolm-2 s-1) දින 3 සිට 5 දක්වා තනි ජනපදයක් දිස්වන තුරු ආලෝකමත් කරන ලදී. තනි ජනපදයක් භාවිතා කර M22+ මධ්‍යම (41) මිලි ලීටර් 10 ක් එන්නත් කරන ලද අතර එයට 0.1% (w/v) කැසමිනෝ අම්ල (මින් ඉදිරියට M22 ලෙස හැඳින්වේ) අතිරේකව ලබා දෙන ලදී. සංස්කෘතිය අඩු ඔක්සිජන් තත්වයන් යටතේ අඳුරේ 34°C උෂ්ණත්වයකදී පැය 48ක් 180 rpm උෂ්ණත්වයකදී සෙලවීමත් සමඟ වගා කරන ලද අතර, පසුව එම තත්වයන් යටතේම පැය 24ක් සඳහා සංස්කෘතියෙන් මිලි ලීටර් 70 ක් එන්නත් කරන ලදී. මිලි ලීටර් 1 ක පරිමාවක් සහිත අර්ධ වායුගෝලීය සංස්කෘතියක් භාවිතා කර M22 මාධ්‍යයෙන් මිලි ලීටර් 30 ක් මිලි ලීටර් 30 ක් විශ්වීය ඉස්කුරුප්පු-ඉහළ විනිවිද පෙනෙන වීදුරු බෝතලයක එන්නත් කරන ලද අතර වඳ චුම්භක බලයෙන් ඇවිස්සෙන දණ්ඩක් මගින් පැය 48ක් කැළඹීමෙන් (~50μmolm-2 s-1) විකිරණය කරන ලදී. ඉන්පසු සංස්කෘතියෙන් මිලි ලීටර් 30 ක් එකම තත්වයන් යටතේ සංස්කෘතිය ලීටර් 1 ක් පමණ එන්නත් කරන ලද අතර, පසුව එය පැය 72ක් සඳහා ~200 μmolm-2 s-1 දී ආලෝකමත් කරන ලද සංස්කෘතිය ලීටර් 9 ක් පමණ එන්නත් කිරීමට භාවිතා කරන ලදී. සෛල 7132 RCF හි මිනිත්තු 30 ක් කේන්ද්‍රාපසාරීකරණය මගින් අස්වනු නෙලන ලද අතර, 20 mM tris-HCl (pH 8.0) හි ~10 ml හි නැවත අසුරා, අවශ්‍ය වන තෙක් -20°C හි ගබඩා කරන ලදී.
දියවීමෙන් පසු, නැවත සවි කරන ලද සෛල වලට ඩිඔක්සිරයිබොනියුක්ලීස් I (මර්ක්, එක්සත් රාජධානිය), ලයිසොසයිම් (මර්ක්, එක්සත් රාජධානිය) සහ රොචේ හොලොඑන්සයිම ප්‍රෝටීස් නිෂේධක පෙති දෙකක් (මර්ක්, එක්සත් රාජධානිය) ස්ඵටික කිහිපයක් එකතු කරන්න. 20,000 psi ප්‍රංශ පීඩන සෛලයක (ඇමින්කෝ, ඇමරිකා එක්සත් ජනපදය), සෛල 8 සිට 12 වතාවක් බාධා ඇති විය. 4°C දී මිනිත්තු 15ක් 18,500 RCF දී කේන්ද්‍රාපසාරීකරණය මගින් නොකැඩූ සෛල සහ දිය නොවන සුන්බුන් ඉවත් කිරීමෙන් පසු, 43,000°C දී පැය 2ක් 113,000 RCF දී කේන්ද්‍රාපසාරීකරණය මගින් පටලය වර්ණක ලයිසේට් වලින් අවක්ෂේප කරන ලදී. ද්‍රාව්‍ය කොටස ඉවතලන්න සහ 20 mM ට්‍රයිස්-HCl (pH 8.0) හි 100 සිට 200 ml දක්වා වර්ණවත් පටලය නැවත සවි කර දෘශ්‍යමාන සමුච්චයන් නොමැති වන තෙක් සමජාතීය කරන්න. අත්හිටවූ පටලය 20 mM tris-HCl (pH 8.0) (Anatrace, USA) හි 2% (w/v) β-DDM අඩංගු වන පරිදි පැය 1ක් අඳුරු ස්ථානයක 4°C උෂ්ණත්වයේ මෘදු ලෙස කලවම් කරමින් පුර්ව තැන්පත් කරන ලදී. ඉන්පසු 70°C දී කේන්ද්‍රාපසාරී කර පැය 1ක් 4°C උෂ්ණත්වයේ දී 150,000 RCF විසුරුවා හැර ඉතිරි ද්‍රාව්‍ය ද්‍රව්‍ය ඉවත් කරන ලදී.
ΔpufW වික්‍රියාවෙන් ලබාගත් ද්‍රාව්‍ය පටලය 0.03% (w / v) β-DDM අඩංගු බන්ධන බෆරයේ තීරු පරිමාවන් තුනකින් (CV) 50 ml DEAE සෙෆරෝස් අයන හුවමාරු තීරුවකට යොදන ලදී [20 mM tris-HCl (pH 8.0)]. CV බන්ධන බෆර දෙකකින් තීරුව සෝදන්න, ඉන්පසු 50 mM NaCl අඩංගු බන්ධන බෆර දෙකකින් තීරුව සෝදන්න. RC-LH116 සංකීර්ණය 1.75 CV මත 150 සිට 300 mM NaCl (බන්ධන බෆරයේ) රේඛීය අනුක්‍රමණයකින් ඉවත් කරන ලද අතර, ඉතිරි බන්ධන සංකීර්ණය 0.5 CV මත 300 mM NaCl අඩංගු බන්ධන බෆරයකින් ඉවත් කරන ලදී. 250 සහ 1000 nm අතර අවශෝෂණ වර්ණාවලිය එකතු කරන්න, අවශෝෂණ අනුපාතය (A880/A280) 1 ට වඩා වැඩි භාගය 880 සිට 280 nm දක්වා තබා ගන්න, බන්ධන බෆරයේ දෙවරක් තනුක කරන්න, සහ DEAE තීරුවේ නැවත එම ක්‍රියා පටිපාටියම භාවිතා කරන්න පිරිසිදු කිරීම මත. 1.7 ට වැඩි A880/A280 අනුපාත සහ 3.0 ට වැඩි A880/A805 අනුපාත සමඟ භාග තනුක කරන්න, අයන හුවමාරුවේ තුන්වන වටය සිදු කරන්න, සහ 2.2 ට වැඩි A880/A280 අනුපාත සහ 5.0 ට වැඩි A880/A805 අනුපාත සහිත භාග රඳවා ගන්න. අර්ධ වශයෙන් පිරිසිදු කරන ලද සංකීර්ණය Amicon 100,000 අණුක බර කැපුම්-ඕෆ් (MWCO) කේන්ද්‍රාපසාරී පෙරහනක (Merck, UK) ~2 ml දක්වා සාන්ද්‍රණය කර, 200 mM NaCl බෆරයක් අඩංගු Superdex 200 16/600 ප්‍රමාණයේ බැහැර කිරීමේ තීරුවක් (GE Healthcare, US) මත පටවා, පසුව එම බෆරයේම 1.5 CV හිදී ඉවත් කරන ලදී. ප්‍රමාණයේ බැහැර කිරීමේ භාගයේ අවශෝෂණ වර්ණාවලිය එකතු කර, 2.4 ට වැඩි A880/A280 අනුපාත සහ 5.8 සිට 100 A880 ට වැඩි A880/A805 අනුපාත සමඟ අවශෝෂණ වර්ණාවලිය සාන්ද්‍රණය කර, වහාම ක්‍රියෝ-TEM ජාලක සකස් කිරීම හෝ ගබඩා කිරීම සඳහා ඒවා භාවිතා කරන්න. අවශ්‍ය වන තෙක් -80°C දී තබා ගන්න.
PufW-His වික්‍රියාවෙන් ලබාගත් ද්‍රාව්‍ය පටලය IMAC බෆරයේ (GE Healthcare) 200 mM NaCl සහ 0.03% (w/w) අඩංගු 20 mM HisPrep FF Ni-NTA සෙෆරෝස් තීරුවකට (20 mM tris-HCl (pH 8.0) යොදන ලදී. v) β-DDM]. තීරුව IMAC බෆරයේ CV පහක් සමඟ සෝදා, පසුව 10 mM හිස්ටයිඩින් අඩංගු IMAC බෆරයේ CV පහක් සමඟ සෝදා ඇත. 100 mM හිස්ටයිඩින් අඩංගු IMAC බෆර පහක් සමඟ මූලික සංකීර්ණය තීරුවෙන් ඉවත් කරන ලදී. RC-LH114-W සංකීර්ණය අඩංගු කොටස Amicon 100,000 MWCO පෙරහනකින් (Merck, UK) සමන්විත කලවම් කළ ටැංකියක ~10 ml දක්වා සාන්ද්‍රණය කර, බන්ධන බෆරයකින් 20 වතාවක් තනුක කර, පසුව 25 ml ට එකතු කරනු ලැබේ. DEAE Sepharose තීරුවේ, බෆරයට බැඳී ඇති CV හතරක් කල්තියා භාවිතා කරනු ලැබේ. තීරුව CV බන්ධන බෆර හතරකින් සෝදන්න, ඉන්පසු 0 සිට 100 mM NaCl (බන්ධන බෆරයෙන්) රේඛීය අනුක්‍රමණයක් මත CV අටක් මත සංකීර්ණය ඉවත් කරන්න, සහ 100 mM බන්ධන බෆරයක් අඩංගු ඉතිරි CV හතර. සෝඩියම් ක්ලෝරයිඩ් මත ඉවත් කරන ලද අවශේෂ සංකීර්ණ 2.4 ට වඩා වැඩි A880/A280 අනුපාතය සහ 4.6 ට වඩා වැඩි A880/A805 අනුපාතය සමඟ ඒකාබද්ධ කර Amicon 100,000 MWCO කේන්ද්‍රාපසාරී පෙරහනක ~2 ml දක්වා සාන්ද්‍රණය කර, කල්තියා 1.5 CV IMAC වලින් පුරවා ඇත. බෆරය සුපර්ඩෙක්ස් 200 16/600 ප්‍රමාණයේ බැහැර කිරීමේ තීරුව සමතුලිත කර, පසුව 1.5 CV ට වැඩි එම බෆරයේම ඉවත් කරන ලදී. ප්‍රමාණය-බැහැර කිරීමේ භාගවල අවශෝෂණ වර්ණාවලීක්ෂය එකතු කර, 2.1 ට වැඩි A880/A280 අනුපාත සහ 4.6 සිට 100 A880 ට වැඩි A880/A805 අනුපාත සමඟ අවශෝෂණ වර්ණාවලීක්ෂය සාන්ද්‍රණය කරන්න, ඒවා ශීත කළ TEM ජාලක සකස් කිරීම සඳහා වහාම භාවිතා කරනු ලැබේ හෝ අවශ්‍ය වන තෙක් -80°C හි ගබඩා කරනු ලැබේ.
අඩු උෂ්ණත්ව TEM ජාලක සකස් කිරීම සඳහා Leica EM GP ගිල්වීමේ ශීතකරණයක් භාවිතා කරන ලදී. සංකීර්ණය IMAC බෆරයේ 50 හි A880 දක්වා තනුක කරන ලද අතර, පසුව 5μl අලුතින් දිලිසෙන-විසර්ජනය කරන ලද QUANTIFOIL 1.2/1.3 කාබන්-ආලේපිත තඹ දැලක් මතට පටවන ලදී (Agar Scientific, UK). ජාලකය 20°C සහ 60% සාපේක්ෂ ආර්ද්‍රතාවයෙන් තත්පර 30ක් සඳහා ඉන්කියුබේට් කරන්න, ඉන්පසු තත්පර 3ක් සඳහා එය වියළා ගන්න, ඉන්පසු -176°C දී ද්‍රව ඊතේන් වල නිවා දමන්න.
RC-LH114-W සංකීර්ණයේ දත්ත eBIC (ඉලෙක්ට්‍රොනික ජෛව ප්‍රතිරූපණ මධ්‍යස්ථානය) (බ්‍රිතාන්‍ය දියමන්ති ආලෝක ප්‍රභවය) මත ටයිටන් ක්‍රියෝස් අන්වීක්ෂයක් සමඟින් පටිගත කරන ලද අතර එය 300kV ක ත්වරණ වෝල්ටීයතාවයකින් ක්‍රියා කරන අතර නාමික විශාලනය 130,000× සහ ශක්තියක් සහිත - 20 eV පරතරයක් තෝරන්න. දත්ත රැස් කිරීම සඳහා ගණන් කිරීමේ මාදිලියේ රූප පටිගත කිරීම සඳහා K2 උච්ච අනාවරකයක් සහිත Gatan 968 GIF ක්වොන්ටම් භාවිතා කරන ලදී. ක්‍රමාංකනය කරන ලද පික්සල් ප්‍රමාණය 1.048Å වන අතර මාත්‍රා අනුපාතය 3.83 e-Å-2s-1 වේ. තත්පර 11 කින් චිත්‍රපටය එකතු කර එය කොටස් 40 කට බෙදා ඇත. අන්වීක්ෂය නැවත නාභිගත කිරීමට කාබන් ආලේපිත ප්‍රදේශය භාවිතා කරන්න, ඉන්පසු සිදුරකට චිත්‍රපට තුනක් එකතු කරන්න. සමස්තයක් වශයෙන්, චිත්‍රපට 3130 ක් එකතු කරන ලද අතර, -1 සහ -3μm අතර නාභිගත කිරීමේ අගයන් ඇත.
RC-LH116 සංකීර්ණය සඳහා දත්ත එක්රැස් කරන ලද්දේ එම අන්වීක්ෂයම භාවිතා කර Asterbury Biostructure Laboratory (UK, Leeds විශ්ව විද්‍යාලය) හිදීය. දත්ත 130 k විශාලනයකින් ගණන් කිරීමේ ආකාරයෙන් රැස් කරන ලද අතර, පික්සල් ප්‍රමාණය 4.6 e-Å-2s-1 මාත්‍රාවකින් 1.065 Å දක්වා ක්‍රමාංකනය කරන ලදී. චිත්‍රපටය තත්පර 12 කින් පටිගත කර කොටස් 48 කට බෙදා ඇත. සමස්තයක් වශයෙන්, චිත්‍රපට 3359 ක් එකතු කරන ලද අතර, -1 සහ -3μm අතර නාභිගත කිරීමේ අගයන් ඇත.
සියලුම දත්ත සැකසුම් Relion 3.0 නල මාර්ගයේ (42) සිදු කෙරේ. මාත්‍රා බර කිරීම මගින් කදම්භ චලිතය නිවැරදි කිරීමට Motioncorr 2 (43) භාවිතා කරන්න, ඉන්පසු CTF (විපරීත හුවමාරු ශ්‍රිතය) පරාමිතිය තීරණය කිරීමට CTFFIND 4.1 (44) භාවිතා කරන්න. මෙම මූලික සැකසුම් අදියරවලින් පසු සාමාන්‍ය ෆොටෝමික්‍රොග්‍රැෆ් රූපය 2 හි දක්වා ඇත. S16. ස්වයංක්‍රීය තේරීමේ සැකිල්ල ජනනය කරනු ලබන්නේ පික්සල 250 රාමුවක අංශු 1000 ක පික්සල 250 ක් පමණ අතින් තෝරා ගැනීමෙන් සහ යොමු ද්විමාන (2D) වර්ගීකරණයක් නොමැති අතර එමඟින් නියැදි දූෂණයට මුහුණ දෙන හෝ හඳුනාගත හැකි ලක්ෂණ නොමැති වර්ගීකරණයන් ප්‍රතික්ෂේප කිරීමෙනි. ඉන්පසු, සියලුම ක්ෂුද්‍ර ඡායාරූප මත ස්වයංක්‍රීය තේරීම සිදු කරන ලද අතර, RC-LH114-W අංශු 849,359 ක් වූ අතර RC-LH116 සංකීර්ණය අංශු 476,547 ක් විය. තෝරාගත් සියලුම අංශු යොමු නොවන 2D වර්ගීකරණයේ වට දෙකකට භාජනය වී ඇති අතර, එක් එක් ධාවනයෙන් පසු, කාබන් ප්‍රදේශය සපුරාලන අංශු, නියැදි දූෂණය, පැහැදිලි ලක්ෂණ නොමැති වීම හෝ දැඩි ලෙස අතිච්ඡාදනය වන අංශු ප්‍රතික්ෂේප කරනු ලැබේ, එහි ප්‍රතිඵලයක් ලෙස 772,033 (90.9%) සහ 359,678 (75.5%) ) RC-LH114-W සහ RC-LH116 හි ත්‍රිමාණ වර්ගීකරණය සඳහා අංශු භාවිතා කරනු ලැබේ. ආරම්භක 3D යොමු ආකෘතිය ස්ටෝචස්ටික් අනුක්‍රමික අවරෝහණ ක්‍රමය භාවිතයෙන් ජනනය කරන ලදී. ආරම්භක ආකෘතිය යොමුවක් ලෙස භාවිතා කරමින්, තෝරාගත් අංශු ත්‍රිමාණයේ කාණ්ඩ හතරකට වර්ගීකරණය කර ඇත. මෙම කාණ්ඩයේ ආකෘතිය යොමුවක් ලෙස භාවිතා කරමින්, විශාලතම කාණ්ඩයේ අංශු මත ත්‍රිමාණ පිරිපහදු කිරීම සිදු කරන්න, ඉන්පසු ද්‍රාවක ප්‍රදේශය ආවරණය කිරීම සඳහා ආරම්භක 15Å අඩු-පාස් පෙරහන භාවිතා කරන්න, මෘදු දාරවල පික්සල 6 ක් එකතු කරන්න, සහ ඉහළ අනාවරකයේ Gatan K2 උච්ච මොඩියුලේෂන් මාරු කිරීමේ කාර්යය නිවැරදි කිරීම සඳහා පික්සල පසු-සකසන්න. RC-LH114-W දත්ත කට්ටලය සඳහා, මෙම ආරම්භක ආකෘතිය ආවරණයේ දාරවල ඇති ප්‍රබල ඝනත්වය ඉවත් කිරීමෙන් වෙනස් කරන ලදී (UCSF චයිමේරා හි මූලික සංකීර්ණ ඝනත්වයෙන් විසන්ධි කර ඇත). ප්‍රතිඵලයක් ලෙස ලැබුණු ආකෘති (RC-LH114-W සහ RC-LH116 හි විභේදන පිළිවෙලින් 3.91 සහ 4.16 Å වේ) ත්‍රිමාණ වර්ගීකරණයේ දෙවන වටය සඳහා යොමුවක් ලෙස භාවිතා කරයි. භාවිතා කරන අංශු ආරම්භක ත්‍රිමාණ පන්තියට කාණ්ඩගත කර ඇති අතර අසල්වැසි ප්‍රදේශය සමඟ ශක්තිමත් සහසම්බන්ධතාවයක් නොමැත. අතිච්ඡාදනය හෝ පැහැදිලි ව්‍යුහාත්මක ලක්ෂණ නොමැතිකම. ත්‍රිමාණ වර්ගීකරණයේ දෙවන වටයෙන් පසුව, ඉහළම විභේදනය සහිත කාණ්ඩය තෝරා ගන්නා ලදී [RC-LH114-W සඳහා, එක් කාණ්ඩයක් අංශු 377,703 (44.5%), RC-LH116 සඳහා, කාණ්ඩ දෙකක් ඇත, මුළු අංශු 260,752 (54.7%), එහිදී ඒවා කුඩා වෙනසක් සමඟ ආරම්භක භ්‍රමණයෙන් පසුව පෙළගස්වන විට පමණක් සමාන වේ]. තෝරාගත් අංශු පික්සල 400 ක පෙට්ටියක නැවත නිස්සාරණය කර ත්‍රිමාණ පිරිපහදු කිරීම මගින් පිරිපහදු කරනු ලැබේ. ද්‍රාවක ආවරණය ජනනය කරනු ලබන්නේ ආරම්භක 15Å අඩු-පාස් පෙරහන, පික්සල 3 සිතියම් ප්‍රසාරණය සහ පික්සල 3 මෘදු ආවරණය භාවිතා කරමිනි. එක් එක් පියවරෙන් පසු ප්‍රතිඵලයක් ලෙස ලැබෙන වයනය තවදුරටත් පිරිපහදු කිරීම සඳහා එක් එක් පියවරෙන් පසු අංශුවකට CTF පිරිපහදු කිරීම, අංශුවකට චලිත නිවැරදි කිරීම සහ එක් එක් අංශුවකට CTF පිරිපහදු කිරීමේ දෙවන වටය, ත්‍රිමාණ පිරිපහදු කිරීම, ද්‍රාවක ආවරණ කිරීම සහ පසු සැකසුම් සිදු කරනු ලැබේ. 0.143 ක FSC (ෆූරියර් ෂෙල් සහසම්බන්ධතා සංගුණකය) කැපුම් අගය භාවිතා කරමින්, RC-LH114-W සහ RC-LH116 හි අවසාන ආකෘතිවල විභේදන පිළිවෙලින් 2.65 සහ 2.80Å වේ. අවසාන ආකෘතියේ FSC වක්‍රය රූපය 2. S17 හි දක්වා ඇත.
සියලුම ප්‍රෝටීන් අනුපිළිවෙල UniProtKB වෙතින් බාගත කර ඇත: LH1-β (PufB; UniProt ID: Q6N9L5); LH1-α (PufA; UniProtID: Q6N9L4); RC-L (PufL; UniProt ID: O83005); RC-M (PufM; UniProt ID: A0A4Z7); RC-H (PuhA; UniProt ID: A0A4Z9); ප්‍රෝටීන්-W (PufW; UniProt ID: Q6N1K3). RC-L, RC-M සහ RC-H හි ප්‍රෝටීන් අනුපිළිවෙල සහ Rba හි ස්ඵටික ව්‍යුහය අඩංගු RC හි සමජාතීය ආකෘතියක් ගොඩනැගීමට SWISS-MODEL (45) භාවිතා කරන ලදී. sphaeroides RC සැකිල්ලක් ලෙස භාවිතා කරන ලදී (PDB ID: 5LSE) (46). ජනනය කරන ලද ආකෘතිය සිතියමට (47) ගැළපීමට, ප්‍රෝටීන් ව්‍යුහය වැඩිදියුණු කිරීමට සහ සහකාරකය [4×BChl a (මොනෝමර් පුස්තකාල අවශේෂ නාමය = BCL), 2×BPh a (BPH), UQ10 (U10) වර්ග එකක් හෝ දෙකක්, හීම් නොවන යකඩ (Fe) එකක් සහ 3,4-ඩයිහයිඩ්‍රොහෙක්සාකාබොනයිල්කොලීන් (QAK)] එකතු කිරීමට Coot (48) භාවිතා කිරීමට UCSF චයිමේරා හි “fit map” මෙවලම භාවිතා කරන්න. මොනෝමර් පුස්තකාලයේ QAK නොමැති බැවින්, එය PHENIX (49) හි eLBOW මෙවලම භාවිතයෙන් පරාමිතිකරණය කරන ලදී.
ඊළඟට, LH1 උප ඒකකය ඉදිකරන ලදී. මුලදී, PHENIX (49) හි ස්වයංක්‍රීය ඉදිකිරීම් මෙවලම සිතියම සහ LH1-α සහ LH1-β ප්‍රෝටීන් අනුපිළිවෙල ආදානය ලෙස භාවිතා කරමින් LH1 අනුක්‍රමයේ කොටසක් ස්වයංක්‍රීයව ගොඩනැගීමට භාවිතා කරන ලදී. වඩාත්ම සම්පූර්ණ LH1 උප ඒකකය තෝරන්න, එය උපුටා ගෙන එය Coot වෙත පටවන්න, එහි නැතිවූ අනුපිළිවෙල අතින් එකතු කරන්න, සහ BCls a (BCL) දෙකක් සහ ස්පිරිලොක්සැන්ටින් (CRT) එකතු කිරීමට පෙර සම්පූර්ණ ව්‍යුහය අතින් පිරිපහදු කරන්න [අදාළ Rps අනුව LH1 සංකීර්ණයේ ඝනත්වය සහ දන්නා කැරොටිනොයිඩ් අන්තර්ගතය. විශේෂ (17)]. සම්පූර්ණ LH1 උප ඒකකය පිටපත් කර, යාබද LH1 ඝනත්වයේ ආදර්ශ නොවන ප්‍රදේශයේ ඩොක් කිරීමට UCSF චයිමේරා “ඩොකින් සිතියම් මෙවලම” භාවිතා කරන්න, ඉන්පසු එය Coot හි පිරිපහදු කරන්න; සියලුම LH1 උප ඒකක ආකෘතිගත කරන තෙක් ක්‍රියාවලිය නැවත කරන්න. RC-LH114-W ව්‍යුහය සඳහා, කූට් හි වෙන් නොකළ ඝනත්වය නිස්සාරණය කිරීමෙන්, ප්‍රෝටීන් USCF චයිමේරා සිතියමේ ඉතිරි ප්‍රෝටීන් නොවන සංරචක වලින් කොටස් කර ඇති අතර ආරම්භක ආකෘතිය සහ ඉතිරි උප ඒකක (ප්‍රෝටීන්-W) ආකෘති නිර්මාණය ස්ථාපිත කිරීම සඳහා ස්වයංක්‍රීය ගොඩනැගීමේ මෙවලම භාවිතා කරයි. PHENIX (49) හි. කූට් (48) හි ප්‍රතිඵලයක් ලෙස ලැබෙන ආකෘතියට කිසියම් අතුරුදහන් වූ අනුපිළිවෙලක් එකතු කරන්න, ඉන්පසු සම්පූර්ණ උප ඒකකය අතින් පිරිපහදු කරන්න. ඉතිරි වෙන් නොකළ ඝනත්වය ලිපිඩ (CDL = CDL, POPC = 6PL සහ POPG = PGT හි PDB මොනෝමර් පුස්තකාල හැඳුනුම්පත), β-DDM ඩිටර්ජන්ට් (LMT) සහ UQ10 අණු (U10) සංයෝජනයට ගැලපේ. ආකෘති සංඛ්‍යාලේඛන සහ ගැළපුමේ දෘශ්‍ය ගුණාත්මකභාවය තවදුරටත් වැඩිදියුණු කළ නොහැකි වන තෙක් සම්පූර්ණ ආරම්භක ආකෘතිය පරිපූර්ණ කිරීම සඳහා කූට් (48) හි PHENIX ප්‍රශස්තිකරණය (49) සහ අතින් ප්‍රශස්තිකරණය භාවිතා කරන්න. අවසාන වශයෙන්, දේශීය සිතියම තියුණු කිරීමට LocScale (50) භාවිතා කරන්න, ඉන්පසු වෙන් නොකළ ඝනත්වය සහ ස්වයංක්‍රීය සහ අතින් ප්‍රශස්තිකරණය ආකෘතිකරණය කිරීමේ තවත් චක්‍ර කිහිපයක් සිදු කරන්න.
අදාළ ඝනත්වයන් තුළ ඩොක් කර ඇති අදාළ පෙප්ටයිඩ, සහ සාධක සහ අනෙකුත් ලිපිඩ සහ ක්විනෝන රූප 1 සහ 2 හි දක්වා ඇත. S18 සිට S23 දක්වා. අවසාන ආකෘතියේ සංඛ්‍යානමය තොරතුරු වගුව S1 හි දක්වා ඇත.
වෙනත් ආකාරයකින් නිශ්චිතව දක්වා නොමැති නම්, UV/Vis/NIR අවශෝෂණ වර්ණාවලීක්ෂය Cary60 වර්ණාවලීක්ෂ ඡායාරූපමානයක් (Agilent, USA) මත 250 nm සිට 1000 nm දක්වා 1 nm පරතරයකින් සහ තත්පර 0.1 ක ඒකාබද්ධ කාලයකින් එකතු කරන ලදී.
නියැදිය 1 හි A880 දක්වා 2 mm මාර්ගයක් සහිත ක්වාර්ට්ස් කුවෙට් එකක තනුක කර, 400 සහ 1000 nm අතර අවශෝෂණ වර්ණාවලිය එකතු කරන්න. චක්‍රලේඛ ද්වි-ක්‍රෝයික් වර්ණාවලීක්ෂය Jasco 810 වර්ණාවලීක්ෂ ධ්‍රැවීයමානයක (Jasco, ජපානය) 400 nm සහ 950 nm අතර 1 nm පරතරයකින් min-1 20 nm ස්කෑන් අනුපාතයකින් එකතු කරන ලදී.
මවුලික වඳවීමේ සංගුණකය තීරණය කරනු ලබන්නේ හර සංකීර්ණය ආසන්න වශයෙන් 50 ක A880 ට තනුක කිරීමෙනි. 10μl පරිමාව 990μl බන්ධන බෆරයක හෝ මෙතනෝල් වල තනුක කර, BChl පිරිහීම අවම කිරීම සඳහා වහාම අවශෝෂණ වර්ණාවලිය එකතු කරන්න. සෑම මෙතනෝල් සාම්පලයකම BChl අන්තර්ගතය 54.8 mM-1 cm-1 හි 771 nm හි වඳවීමේ සංගුණකය මගින් ගණනය කරන ලද අතර, වඳවීමේ සංගුණකය තීරණය කරන ලදී (51). මනින ලද BChl සාන්ද්‍රණය 32 (RC-LH114-W) හෝ 36 (RC-LH116) න් බෙදන්න, ඉන්පසු එය බෆරයේ එකතු කරන ලද එකම සාම්පලයේ අවශෝෂණ වර්ණාවලිය තීරණය කිරීමට භාවිතා කරයි. වඳවීමේ සංගුණකය. සමාන්තරව. සෑම සාම්පලයක් සඳහාම නැවත නැවත මිනුම් තුනක් ගන්නා ලද අතර, ගණනය කිරීම සඳහා BChl Qy උපරිමයේ සාමාන්‍ය අවශෝෂණය භාවිතා කරන ලදී. 878 nm හිදී මනින ලද RC-LH114-W හි වඳවීමේ සංගුණකය 3280±140 mM-1 cm-1 වන අතර, 880 nm හිදී මනින ලද RC-LH116 හි වඳවීමේ සංගුණකය 3800±30 mM-1 cm-1 වේ.
(52) හි ක්‍රමයට අනුව UQ10 ප්‍රමාණනය කරන ලදී. කෙටියෙන් කිවහොත්, ප්‍රතිලෝම අවධිය HPLC (RP-HPLC) Agilent 1200 HPLC පද්ධතිය භාවිතයෙන් සිදු කරන ලදී. 0.02% (w/v) ෆෙරික් ක්ලෝරයිඩ් අඩංගු 50:50 මෙතනෝල්:ක්ලෝරෝෆෝම් 50μl හි RC-LH116 හෝ RC-LH114-W හි 0.02 nmol පමණ විසුරුවා හරින්න, සහ පූර්ව සමතුලිත කරන ලද Beckman Coulter Ultrasphere ODS 4.6 mm එන්නත් කරන්න. ×25 cm තීරුවක HPLC ද්‍රාවකයේ (80:20 මෙතනෝල්:2-ප්‍රොපනෝල්) 40°C දී 1 ml-1 min-1 හි දිය කරන්න. පැය 1 ක් සඳහා 275 nm (UQ10), 450 nm (කැරොටිනොයිඩ්) සහ 780 nm (BChl) හි අවශෝෂණය නිරීක්ෂණය කිරීම සඳහා HPLC ද්‍රාවකයක සමස්ථානික ඉවත් කිරීම සිදු කරන්න. මිනිත්තු 25.5 දී 275 nm වර්ණදේහයේ උච්චතම අවස්ථාව ඒකාබද්ධ කරන ලද අතර, එහි වෙනත් හඳුනාගත හැකි සංයෝග අඩංගු නොවීය. 0 සිට 5.8 nmol දක්වා පිරිසිදු ප්‍රමිතීන් එන්නත් කිරීමෙන් ගණනය කරන ලද ක්‍රමාංකන වක්‍රයට අදාළව නිස්සාරණය කරන ලද UQ10 හි මවුලික ප්‍රමාණය ගණනය කිරීම සඳහා ඒකාබද්ධ ප්‍රදේශය භාවිතා කරයි (රූපය S14). සෑම සාම්පලයක්ම අනුපිටපත් තුනකින් විශ්ලේෂණය කරන ලද අතර, වාර්තා කරන ලද දෝෂය සාමාන්‍යයේ SD ට අනුරූප වේ.
උපරිම Qy අවශෝෂණය 0.1 ක් සහිත RC-LH1 සංකීර්ණයක් අඩංගු ද්‍රාවණයක් 30 μM අඩු කළ අශ්ව හෘද සයිටොක්‍රෝම් c2 (මර්ක්, එක්සත් රාජධානිය) සහ 0 සිට 50 μMUQ2 (මර්ක්, එක්සත් රාජධානිය) සමඟ සකස් කරන ලදී. සෑම UQ2 සාන්ද්‍රණයකදීම 1-ml සාම්පල තුනක් සකස් කරන ලද අතර මැනීමට පෙර අඳුරට සම්පූර්ණ අනුවර්තනය සහතික කිරීම සඳහා 4°C දී අඳුරේ එක රැයකින් ඉන්කියුබේට් කරන ලදී. ද්‍රාවණය 300 nm දැල්ල/500 රේඛා දැලක, 1.24 mm ඇතුල්වීමක්, 0.12 mm මැද සහ 0.6 mm පිටවීමේ ස්ලිට් වලින් සමන්විත OLIS RSM1000 මොඩියුලර් වර්ණාවලීක්ෂ ඡායාරූපමානයකට පටවන ලදී. උද්දීපන ආලෝකය බැහැර කිරීම සඳහා නියැදි ෆොටෝටියුබ් සහ යොමු ෆොටෝමල්ටිප්ලියර් නළයේ දොරටුවේ 600 nm දිග ​​පාස් පෙරහනක් තබා ඇත. අවශෝෂණය 550 nm දී තත්පර 0.15 ක ඒකාබද්ධ කිරීමේ කාලයක් සහිතව නිරීක්ෂණය කරන ලදී. මෙම උද්දීපන ආලෝකය 880 nm M880F2 LED (ආලෝක විමෝචක ඩයෝඩය) (Thorlabs Ltd., UK) වෙතින් DC2200 පාලකයක් (Thorlabs Ltd., UK) හරහා 90% තීව්‍රතාවයකින් යුත් ෆයිබර් ඔප්ටික් කේබලයක් හරහා විමෝචනය වන අතර 90° ක කෝණයකින් ආලෝක ප්‍රභවයට විමෝචනය වේ. නියැදිය මගින් මුලින් අවශෝෂණය නොකළ ඕනෑම ආලෝකයක් ආපසු ලබා දීම සඳහා මිනුම් කදම්භය දර්පණයට ප්‍රතිවිරුද්ධ වේ. තත්පර 50 ක ආලෝකකරණයට තත්පර 10 කට පෙර අවශෝෂණය නිරීක්ෂණය කරන්න. ඉන්පසු ක්විනොලෝල් ස්වයංසිද්ධව සයිටොක්‍රෝම් c23 + අඩු කරන ප්‍රමාණය තක්සේරු කිරීම සඳහා අඳුරේ තත්පර 60 ක් සඳහා අවශෝෂණය තවදුරටත් නිරීක්ෂණය කරන ලදී (අමු දත්ත සඳහා රූපය S8 බලන්න).
තත්පර 0.5 සිට 10 දක්වා (UQ2 සාන්ද්‍රණය මත පදනම්ව) රේඛීය ආරම්භක අනුපාතයක් සවි කිරීමෙන් සහ එක් එක් UQ2 සාන්ද්‍රණයේදී සාම්පල තුනේම අනුපාත සාමාන්‍යකරණය කිරීමෙන් දත්ත සකසන ලදී. අදාළ වඳවීමේ සංගුණකය මගින් ගණනය කරන ලද RC-LH1 සාන්ද්‍රණය අනුපාතය උත්ප්‍රේරක කාර්යක්ෂමතාව බවට පරිවර්තනය කිරීම සඳහා භාවිතා කරන ලද අතර, Origin Pro 2019 (OriginLab, USA) හි සැලසුම් කර ඇති අතර, පෙනෙන Km සහ Kcat අගයන් තීරණය කිරීම සඳහා Michaelis-Menten ආකෘතියට සවි කර ඇත.
අස්ථිර අවශෝෂණ මිනුම් සඳහා, RC-LH1 සාම්පලය 50 mM සෝඩියම් ඇස්කෝර්බේට් (මර්ක්, ඇමරිකා එක්සත් ජනපදය) සහ 0.4 mM ටර්බුටින් (මර්ක්, ඇමරිකා එක්සත් ජනපදය) අඩංගු IMAC බෆරයේ ~2μM දක්වා තනුක කරන ලදී. ඇස්කෝර්බික් අම්ලය පූජා ඉලෙක්ට්‍රෝන පරිත්‍යාගශීලියෙකු ලෙස භාවිතා කරන අතර, මිනුම් ක්‍රියාවලිය පුරාවට ප්‍රධාන RC පරිත්‍යාගශීලියා අඩු මට්ටමක පවතින බව (එනම්, ප්‍රකාශ ඔක්සිකරණය නොකළ) සහතික කිරීම සඳහා ටර්ට්-බියුටක්ලොෆෙන් QB නිෂේධකයක් ලෙස භාවිතා කරයි. ලේසර් මාර්ගයේ ඇති නියැදියට උද්දීපන ස්පන්දන අතර අඳුරු අනුවර්තනය සඳහා ප්‍රමාණවත් කාලයක් ඇති බව සහතික කිරීම සඳහා 2 mm දෘශ්‍ය මාර්ග දිගක් සහිත අභිරුචි භ්‍රමණය වන සෛලයකට (විෂ්කම්භය මීටර් 0.1 ක් පමණ, 350 RPM) සාම්පලයෙන් මිලි ලීටර් 3 ක් පමණ එකතු කරනු ලැබේ. 1 kHz (NIR සඳහා 20 nJ හෝ Vis සඳහා 100 nJ) පුනරාවර්තන අනුපාතයකින් 880 nm ට නියැදිය උද්දීපනය කිරීමට Ti: Sapphire ලේසර් පද්ධතිය (Spectra Physics, ඇමරිකා එක්සත් ජනපදය) විස්තාරණය කිරීමට ~100-fs ලේසර් ස්පන්දන භාවිතා කරන්න. දත්ත රැස් කිරීමට පෙර, නියැදිය විනාඩි 30ක් පමණ උද්දීපන ආලෝකයට නිරාවරණය කරන්න. නිරාවරණය QA අක්‍රිය වීමට හේතු වේ (සමහර විට QA වරක් හෝ දෙවරක් අඩු කළ හැකිය). නමුත් මෙම ක්‍රියාවලිය ආපසු හැරවිය හැකි බව කරුණාවෙන් සලකන්න, මන්ද දිගු කාලයක් අඳුරු අනුවර්තනය වීමෙන් පසු, RC සෙමෙන් QA ක්‍රියාකාරිත්වයට නැවත පැමිණෙනු ඇත. -10 සිට 7000 ps දක්වා ප්‍රමාද කාලයක් සහිත අස්ථිර වර්ණාවලි මැනීම සඳහා හීලියෝස් වර්ණාවලීක්ෂයක් (අල්ට්‍රාෆාස්ට් සිස්ටම්ස්, ඇමරිකා එක්සත් ජනපදය) භාවිතා කරන ලදී. දත්ත කට්ටල කාණ්ඩගත කිරීමට, පසුව ඒකාබද්ධ කිරීමට සහ ප්‍රමිතිකරණය කිරීමට සර්ෆේස් එක්ස්ප්ලෝරර් මෘදුකාංගය (අල්ට්‍රාෆාස්ට් සිස්ටම්ස්, ඇමරිකා එක්සත් ජනපදය) භාවිතා කරන්න. ක්ෂය වීමට අදාළ අවකල වර්ණාවලි ලබා ගැනීමට ඒකාබද්ධ දත්ත කට්ටලය භාවිතා කිරීමට කාපට්වීව් මෘදුකාංග පැකේජය (ලයිට් කන්වර්ෂන් ලිමිටඩ්, ලිතුවේනියාව) භාවිතා කරන්න, නැතහොත් සම්භවය (ඔරිජින්ලැබ්, ඇමරිකා එක්සත් ජනපදය) හි තනි තරංග ආයාම වර්ණාවලි පරිණාමයට ගැලපෙන පරිදි උපකරණ ප්‍රතිචාරය සමඟ බහු ඝාතකයන් ඒකාබද්ධ කරන ශ්‍රිතයක් භාවිතා කරන්න.
ඉහත සඳහන් කළ පරිදි (53), RC සහ පර්යන්ත LH2 ඇන්ටෙනාව යන දෙකම නොමැති LH1 සංකීර්ණය අඩංගු ප්‍රභාසංස්ලේෂක පටලයක් සකස් කරන ලදී. පටලය 20 mM ට්‍රයිස් (pH 8.0) තුළ තනුක කර පසුව 2 mm දෘශ්‍ය මාර්ගයක් සහිත ක්වාර්ට්ස් කුවෙට් එකකට පටවන ලදී. -10 සිට 7000 ps දක්වා ප්‍රමාද කාලයක් සහිත 540 nm හි නියැදිය උද්දීපනය කිරීම සඳහා 30nJ ලේසර් ස්පන්දනයක් භාවිතා කරන ලදී. Rps. pal නියැදිය සඳහා විස්තර කර ඇති පරිදි දත්ත කට්ටලය සකසන්න.
4°C දී පැය 2ක් සඳහා 150,000 RCF දී කේන්ද්‍රාපසාරීකරණය මගින් පටලය පෙති කරන ලද අතර, පසුව 880 nm දී එහි අවශෝෂණය 20 mM tris-HCl (pH 8.0) සහ 200 mM NaCl හි නැවත රඳවා ගන්නා ලදී. 4°C දී අඳුරේ පැය 1ක් සඳහා 2% (w/v) β-DDM සෙමින් කලවම් කිරීමෙන් පටලය විසුරුවා හරින්න. නියැදිය 100 mM ට්‍රයිඑතිලමෝනියම් කාබනේට් (pH 8.0) (TEAB; මර්ක්, UK) හි 2.5 mg ml-1 ප්‍රෝටීන් සාන්ද්‍රණයකට තනුක කරන ලදී (ජෛව-රැඩ් විශ්ලේෂණය). 1% (w/v) සෝඩියම් ලෝරේට් (මර්ක්, UK) අඩංගු මුළු 50 μl TEAB බවට 50 μg ප්‍රෝටීන් තනුක කිරීමෙන් ආරම්භ වන, පෙර ප්‍රකාශිත ක්‍රමයෙන් (54) තවදුරටත් සැකසුම් සිදු කරන ලදී. තත්පර 60ක් සඳහා sonication කිරීමෙන් පසු, එය 37°C දී මිනිත්තු 30ක් සඳහා 5 mM tris(2-carboxyethyl)phosphine (Merck, UK) සමඟ අඩු කරන ලදී. S-alkylation සඳහා, සාම්පලය 10 mM methyl S-methylthiomethanesulfonate (Merck, UK) සමඟ පුර්ව ලියාපදිංචි කර කාමර උෂ්ණත්වයේ දී මිනිත්තු 10ක් සඳහා 200 mM isopropanol තොග ද්‍රාවණයකින් එකතු කරන්න. ප්‍රෝටියෝලයිටික් ජීර්ණය සිදු කරන ලද්දේ ට්‍රිප්සින්/එන්ඩොප්‍රෝටීනේස් Lys-C මිශ්‍රණය (Promega UK) 2 μg එකතු කිරීමෙන් සහ පැය 3ක් 37°C දී පුර්ව ලියාපදිංචි කිරීමෙන් ය. ලෝරේට් සර්ෆැක්ටන්ට් නිස්සාරණය කරන ලද්දේ 50 μl එතිල් ඇසිටේට් සහ 10 μl 10% (v/v) LC ශ්‍රේණියේ ට්‍රයිෆ්ලෝරෝඇසිටික් අම්ලය (TFA; Thermo Fisher Scientific, UK) එකතු කිරීමෙන් සහ තත්පර 60ක් සඳහා vortexing කිරීමෙනි. අදියර වෙන් කිරීම මිනිත්තු 5 ක් සඳහා 15,700 RCF හි කේන්ද්‍රාපසාරීකරණය මගින් ප්‍රවර්ධනය කරන ලදී. නිෂ්පාදකයාගේ ප්‍රොටෝකෝලයට අනුව, පෙප්ටයිඩය අඩංගු පහළ අවධිය ප්‍රවේශමෙන් ආශ්වාස කර ලුණු ඉවත් කිරීම සඳහා C18 භ්‍රමණ තීරුවක් (තර්මෝ ෆිෂර් සයන්ටිෆික්, එක්සත් රාජධානිය) භාවිතා කරන ලදී. රික්ත කේන්ද්‍රාපසාරීකරණය මගින් වියළීමෙන් පසු, නියැදිය 0.5% TFA සහ 3% ඇසිටොනයිට්‍රයිල් වල දිය කරන ලද අතර, කලින් විස්තර කර ඇති පද්ධති පරාමිතීන් භාවිතා කරමින් ස්කන්ධ වර්ණාවලීක්ෂය සමඟ සම්බන්ධ වූ නැනෝ ප්‍රවාහ RP වර්ණදේහ විද්‍යාව මගින් 500 ng විශ්ලේෂණය කරන ලදී.
Rps. palustris proteome දත්ත සමුදාය (www.uniprot.org/proteomes/UP000001426) සෙවීම සඳහා ප්‍රෝටීන් හඳුනාගැනීම සහ ප්‍රමාණකරණය සඳහා MaxQuant v.1.5.3.30 (56) භාවිතා කරන්න. ස්කන්ධ වර්ණාවලීක්ෂමිතික ප්‍රෝටියෝමික්ස් දත්ත PXD020402 දත්ත කට්ටල හඳුනාගැනීම යටතේ PRIDE හවුල්කරු ගබඩාව (http://proteomecentral.proteomexchange.org) හරහා ProteomeXchange Alliance හි තැන්පත් කර ඇත.
ඉලෙක්ට්‍රෝස්ප්‍රේ අයනීකරණ ස්කන්ධ වර්ණාවලීක්ෂය සමඟ RPLC මගින් විශ්ලේෂණය සඳහා, RC-LH1 සංකීර්ණය වල්-වර්ගයේ Rps වලින් සකස් කරන ලදී. කලින් ප්‍රකාශයට පත් කරන ලද ක්‍රමය (16) භාවිතා කරමින්, පැලුස්ට්‍රිස් සෛලවල නිපදවන ප්‍රෝටීන් සාන්ද්‍රණය 20 mM Hepes (pH 7.8), 100 mM NaCl සහ 0.03% (w/v) β- (ජෛව-රැඩ් විශ්ලේෂණය) ) DDM හි 2 mg ml-1 විය. නිෂ්පාදකයාගේ ප්‍රොටෝකෝලයට අනුව, වර්ෂාපතන ක්‍රමය මගින් 10 μg ප්‍රෝටීන් නිස්සාරණය කිරීම සඳහා 2D පිරිසිදු කිරීමේ කට්ටලය (GE Healthcare, USA) භාවිතා කරන්න, සහ අවක්ෂේපය 20 μl 60% (v/v) ෆෝමික් අම්ලය (FA), 20% (v/v) ඇසිටොනයිට්‍රයිල් සහ 20% (v/v) ජලයේ දිය කරන්න. ස්කන්ධ වර්ණාවලීක්ෂය (Maxis UHR-TOF, Bruker) සමඟ RPLC (Dionex RSLC) මගින් මයික්‍රොලීටර් පහක් විශ්ලේෂණය කරන ලදී. 60°C සහ 100μlmin -1 හිදී වෙන් කිරීම සඳහා MabPac 1.2×100 mm තීරුව (Thermo Fisher Scientific, UK) භාවිතා කරන්න, 85% (v / v) ද්‍රාවක A [0.1% (v / v) FA සහ 0.02% (V/v) TFA ජලීය ද්‍රාවණය] සිට 85% (v/v) ද්‍රාවක B [0.1% (v/v) FA සහ 0.02% (v/v) 90% (v/v) ඇසිටොනයිට්‍රයිල් TFA] දක්වා අනුක්‍රමණයක් සහිතව. සම්මත විද්‍යුත් ඉසින අයනීකරණ ප්‍රභවය සහ පෙරනිමි පරාමිතීන් මිනිත්තු 60 කට වඩා වැඩි කාලයක් භාවිතා කරමින්, ස්කන්ධ වර්ණාවලීක්ෂය 100 සිට 2750 m/z (ස්කන්ධ-ආරෝපණ අනුපාතය) ලබා ගනී. ExPASy ජෛව තොරතුරු තාක්ෂණ සම්පත් ද්වාරය FindPept මෙවලම (https://web.expasy.org/findpept/) ආධාරයෙන්, ස්කන්ධ වර්ණාවලිය සංකීර්ණයේ උප ඒකක වෙත සිතියම්ගත කරන්න.
සෛල පැය 72ක් NF-අඩු (10μMm-2 s-1), මධ්‍යම (30μMm-2 s-1) හෝ ඉහළ (300μMm-2 s-1) ආලෝකය යටතේ වගා කරන ලදී. M22 මධ්‍යම (ඇමෝනියම් සල්ෆේට් ඉවත් කර සෝඩියම් සුසිනේට් සෝඩියම් ඇසිටේට් මගින් ප්‍රතිස්ථාපනය කරන M22 මාධ්‍යය) මිලි ලීටර් 100 ඉස්කුරුප්පු-ඉහළ බෝතලයක (23). තත්පර 30ක චක්‍ර පහකදී, සෛල ලයිස් කිරීම සඳහා මයික්‍රෝන වීදුරු පබළු 0.1ක් 1:1 පරිමා අනුපාතයකින් පබළු කර විනාඩි 5ක් අයිස් මත සිසිල් කරන ලදී. දිය නොවන ද්‍රව්‍ය, නොකැඩූ සෛල සහ වීදුරු පබළු බංකු මුදුනේ ක්ෂුද්‍ර කේන්ද්‍රාපසාරී යන්ත්‍රයක විනාඩි 10ක් සඳහා 16,000 RCF හි කේන්ද්‍රාපසාරීකරණය මගින් ඉවත් කරන ලදී. පටලය පැය 10ක් සඳහා 40/15% (w/w) සුක්‍රෝස් අනුක්‍රමණයක් සහිතව 20 mM tris-HCl (pH 8.0) හි 100,000 RCF සහිත Ti 70.1 රොටරයකින් වෙන් කරන ලදී.
අපගේ පෙර කාර්යයේ විස්තර කර ඇති පරිදි, PufW (16) හි ඔහුගේ ටැගයේ ප්‍රතිශක්තිකරණ හඳුනාගැනීම. කෙටියෙන් කිවහොත්, 2x SDS පැටවීමේ බෆරයේ (මර්ක්, එක්සත් රාජධානිය) පිරිසිදු කරන ලද හර සංකීර්ණය (11.8 nM) හෝ RC හි එකම සාන්ද්‍රණය අඩංගු පටලය (අඩු කරන ලද වෙනස වර්ණාවලිය අඩු කිරීමෙන් ඔක්සිකරණය මගින් තීරණය කරනු ලබන අතර පැල්ලම් සහිත ජෙල් මත බර ගැලපීම මගින් තීරණය වේ). ප්‍රෝටීන අනුරුවක් 12% bis-tris NuPage ජෙල් (Thermo Fisher Scientific, UK) මත වෙන් කරන ලදී. RC-L උප ඒකකය පැටවීමට සහ දෘශ්‍යමාන කිරීමට Coomassie Brilliant Blue (Bio-Rad, UK) සමඟ ජෙල් එකක් පැල්ලම් කරන ලදී. දෙවන ජෙල් මත ඇති ප්‍රෝටීනය ප්‍රතිශක්තිකරණ විශ්ලේෂණය සඳහා මෙතනෝල්-සක්‍රිය පොලිවයිනයිලයිඩීන් ෆ්ලෝරයිඩ් (PVDF) පටලයට (Thermo Fisher Scientific, UK) මාරු කරන ලදී. PVDF පටලය 50 mM tris-HCl (pH 7.6), 150 mM NaCl, 0.2% (v / v) Tween-20 සහ 5% (w / v) ඉවත් කළ කිරිපිටි වල අවහිර කර, පසුව ප්‍රති-හිස් ප්‍රාථමික ප්‍රතිදේහය සමඟ (1:1000 A190-114A, බෙතයිල් රසායනාගාර, ඇමරිකා එක්සත් ජනපදය) තනුක කර ප්‍රතිදේහ බෆරය [50 mM tris-HCl (pH 7.6), 150 mM NaCl සහ 0.05% (v/v) Tween-20] පැය 4 ක් සඳහා ඉන්කියුබේට් කරන ලදී. ප්‍රතිදේහ බෆරයේ මිනිත්තු 5 ක් 3 වතාවක් සේදීමෙන් පසු, පටලය අශ්ව කරල් පෙරොක්සිඩේස් (සිග්මා-ඇල්ඩ්‍රිච්, එක්සත් රාජධානිය) ප්‍රති-මූසික ද්විතියික ප්‍රතිදේහය (ප්‍රතිදේහ බෆරයේ 1:10,000 තනුක කර ඇත) සමඟ ඒකාබද්ධ කරන ලදී. WESTAR ETA C 2.0 රසායන ප්‍රදීපක උපස්ථරය (සයනජන්, ඉතාලිය) සහ Amersham Imager 600 (GE Healthcare, UK) භාවිතයෙන් හඳුනා ගැනීමට ඉඩ සැලසීමට (ප්‍රතිදේහ බෆරයේ 3 සේදීමෙන් මිනිත්තු 5 කට පසු) ඉන්කියුබේට් කරන්න.
ImageJ (57) හි, එක් එක් පැල්ලම් සහිත ජෙල් හෝ ප්‍රතිශක්තිකරණ පරීක්ෂණ මංතීරුවේ තීව්‍රතා ව්‍යාප්තිය ඇඳීමෙන්, උච්චතම ප්‍රදේශය ඒකාබද්ධ කිරීමෙන් සහ RC-L (පැල්ලම් සහිත ජෙල්) සහ ප්‍රෝටීන්-W (ප්‍රතිශක්තිකරණ පරීක්ෂණ) වල තීව්‍රතා අනුපාතය ගණනය කිරීමෙන් රූපය සකසන්න. පිරිසිදු RC-LH114-W සාම්පලයේ RC-L සහ ප්‍රෝටීන්-W අනුපාතය 1:1 බව උපකල්පනය කිරීමෙන් සහ ඒ අනුව සම්පූර්ණ දත්ත කට්ටලය සාමාන්‍යකරණය කිරීමෙන් මෙම අනුපාත මවුලික අනුපාත බවට පරිවර්තනය කරන ලදී.
මෙම ලිපිය සඳහා අතිරේක ද්‍රව්‍ය සඳහා, කරුණාකර http://advances.sciencemag.org/cgi/content/full/7/3/eabe2631/DC1 බලන්න.
මෙය Creative Commons Attribution බලපත්‍රයේ නියමයන් යටතේ බෙදා හරින ලද විවෘත ප්‍රවේශ ලිපියකි. මුල් කෘතිය නිසි ලෙස උපුටා දක්වා ඇති කොන්දේසිය යටතේ, ඕනෑම මාධ්‍යයකින් සීමා රහිතව භාවිතා කිරීමට, බෙදා හැරීමට සහ ප්‍රතිනිෂ්පාදනය කිරීමට ලිපිය ඉඩ දෙයි.
සටහන: අපි ඔබෙන් ඉල්ලා සිටින්නේ ඔබගේ විද්‍යුත් තැපැල් ලිපිනය ලබා දෙන ලෙසයි, එවිට ඔබ පිටුවට නිර්දේශ කරන පුද්ගලයාට ඔබට විද්‍යුත් තැපෑල දැකීමට අවශ්‍ය බවත් එය ස්පෑම් නොවන බවත් දැනගත හැකිය. අපි කිසිදු විද්‍යුත් තැපැල් ලිපිනයක් ග්‍රහණය නොකරමු.
ඔබ අමුත්තෙකු දැයි පරීක්ෂා කිරීමට සහ ස්වයංක්‍රීය ස්පෑම් ඉදිරිපත් කිරීම වැළැක්වීමට මෙම ප්‍රශ්නය භාවිතා කරයි.
ඩේවිඩ් ජේ. කේ. ස්වේන්ස්බරි, පාර්ක් ක්වාන්, පිලිප් ජේ. ජැක්සන්, කයිට්ලින් එම්. ෆාරීස්, ඩේරියුස් එම්. නීඩ්ස්විඩ්ස්කි, එලිසබෙත් සී. මාටින්, ඩේවිඩ් ඒ. ෆාමර්, ලෝර්නා ඒ. මැලෝන්, රෙබෙකා එෆ්. තොම්සන්, නීල් ඒ. රැන්සන්, ඩැනියෙල් පී. කැනිෆ්, මාර්ක් ජේ. ඩික්මන්, ඩිවි හෝල්ටන්, ක්‍රිස්ටීන් කිර්මයිර්, ඇන්ඩෲ හිච්කොක්, සී. නීල් හන්ටර්
ප්‍රතික්‍රියා මධ්‍යස්ථානයේ ඇති ආලෝක උගුල් 1 සංකීර්ණයේ අධි-විභේදන ව්‍යුහය ක්විනෝන් ගතිකය පිළිබඳ නව අවබෝධයක් ලබා දෙයි.
ඩේවිඩ් ජේ. කේ. ස්වේන්ස්බරි, පාර්ක් ක්වාන්, පිලිප් ජේ. ජැක්සන්, කයිට්ලින් එම්. ෆාරීස්, ඩේරියුස් එම්. නීඩ්ස්විඩ්ස්කි, එලිසබෙත් සී. මාටින්, ඩේවිඩ් ඒ. ෆාමර්, ලෝර්නා ඒ. මැලෝන්, රෙබෙකා එෆ්. තොම්සන්, නීල් ඒ. රැන්සන්, ඩැනියෙල් පී. කැනිෆ්, මාර්ක් ජේ. ඩික්මන්, ඩිවි හෝල්ටන්, ක්‍රිස්ටීන් කිර්මයිර්, ඇන්ඩෲ හිච්කොක්, සී. නීල් හන්ටර්
ප්‍රතික්‍රියා මධ්‍යස්ථානයේ ඇති ආලෝක උගුල් 1 සංකීර්ණයේ අධි-විභේදන ව්‍යුහය ක්විනෝන් ගතිකය පිළිබඳ නව අවබෝධයක් ලබා දෙයි.
©2021 විද්‍යාවේ දියුණුව සඳහා වූ ඇමරිකානු සංගමය. සියලු හිමිකම් ඇවිරිණි. AAAS HINARI, AGORA, OARE, CHORUS, CLOCKSS, CrossRef සහ COUNTER හි හවුල්කරුවෙකි. ScienceAdvances ISSN 2375-2548.